基本信息
- 项目名称：
- 冰片对LPS诱导THP-1细胞产生TNF-α的影响
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 本项目通过以天然右旋冰片干预LPS刺激下的THP-1细胞炎症模型，并以L929细胞株检测法测定其TNF-α的分泌量，发现冰片干预下可使LPS致炎的巨噬细胞的TNF-α分泌量显著降低，提示天然右旋冰片具有抗炎作用，且其作用机制可能与抑制巨噬细胞的TNF-α分泌有关。
- 详细介绍：
- 本项目旨在探讨中药天然右旋冰片对脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）刺激后的THP-1巨噬细胞产生肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）的影响。 通过培养人类单核白血病细胞株——THP-1细胞，在佛波酯（Phorbol-12-myristate-13-acetate, PMA）作用下分化为巨噬细胞。以LPS刺激细胞造炎症细胞模型，加入天然右旋冰片进行干预，以地塞米松作为阳性对照，L929细胞株检测法测定其上清液中TNF-α的含量。 结果：LPS刺激PMA分化后的THP-1细胞，其TNF-α含量明显升高（与正常对照组相比P<0.01）,冰片干预下可使LPS致炎的巨噬细胞的TNF-α分泌量显著降低（与炎症模型组相比P<0.01），可使其分泌量恢复至正常水平（与正常对照组相比P>0.05），其作用效果优于实验浓度下的经典抗炎药物——地塞米松（与正常对照组相比P<0.05）。 结论：中药天然右旋冰片可通过显著降低LPS刺激下巨噬细胞的TNF-α分泌量，提示天然右旋冰片具有抗炎作用，且其作用机制可能与抑制巨噬细胞的TNF-α分泌有关。
作品专业信息
撰写目的和基本思路
- 目的：探讨中药天然右旋冰片对脂多糖刺激后的THP-1巨噬细胞产生TNF-α的影响。 基本思路：利用人类单核白血病细胞株THP-1细胞，在 PMA作用22.5h后分化为巨噬细胞，以LPS刺激细胞造炎症细胞模型，30min后加入天然右旋冰片进行干预，以地塞米松作为阳性对照，作用1h后收集培养上清液，L929细胞株检测法测定其TNF-α的含量。
科学性、先进性及独特之处
- 科学性： 1、L929细胞株对TNF-α的敏感性得到科研工作者认可；2、实验中使用阳性对照，有效地评价了冰片对THP-1释放TNF-α影响；4、实验过程中，反复考察培养环境及其他影响因素对实验的影响，使结果更准确可靠。 先进性与独特之处： 1、首创使用体外细胞实验检测冰片对LPS诱导THP-1细胞产生TNF-α的影响
应用价值和现实意义
- 1、鉴于冰片在临床中的大量使用，本实验结果可以知道临床用药； 2、通过研究数据表明，冰片具有较好的抑制巨噬细胞分泌TNF-α，可为以后TNF-α的中药抑制剂开发提供先导化合物； 3、证实了前人抗炎实验结果猜想的科学性。
学术论文摘要
- 目的：探讨中药天然右旋冰片对脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）刺激后的THP-1巨噬细胞产生TNF-α的影响。 方法：培养人类单核白血病细胞株——THP-1细胞，在PMA作用下分化为巨噬细胞。PMA作用22.5h后，以LPS刺激细胞造炎症细胞模型，30min后加入天然右旋冰片进行干预，以地塞米松作为阳性对照，作用1h后收集培养上清液，L929细胞株检测法测定其TNF-α的含量。结果：LPS刺激PMA分化后的THP-1细胞，其TNF-α含量明显升高,冰片干预下可使LPS致炎的巨噬细胞的TNF-α分泌量显著降低，可使其分泌量恢复至正常水平，其作用效果优于实验浓度下的经典抗炎药物——地塞米松。结论：中药天然右旋冰片可通过显著降低LPS刺激下巨噬细胞的TNF-α分泌量，提示天然右旋冰片具有抗炎作用，且其作用机制可能与抑制巨噬细胞的TNF-α分泌有关。
获奖情况
- 无
鉴定结果
- 无
参考文献
- ［1］王术玲．小檗碱联合厚朴酚对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞的干预 ［2］魏楚蓉．冰片的药理作用及其机制研究进展［4］ 王棋文，宋德荣，李剑勇，等．抗炎药物及作用机理最新研究进展 ［3］ Bashar S，Bernadette S A，Walid B，et al．Hypericum triquetrifolium-Derived Factors Downregulate the Production Levels of LPS-Induced Nitric Oxide and Tumor Necrosis Factor-α in THP-1 Cells ［4］李玮，王秀丽，王青，等．熟地黄水提液对小鼠单核细胞分泌TNF-α的影响 ［5］谭立军，陈新宇，张岚，等．DMSO和As2O3对人食管癌细胞增殖的抑制作用 ［6］ Li Y，JinBo Y， Jia C，et al． Enhancement of human ACAT1 gene expression to promote the macrophagederived foam cell formation by dexamethasone ［7］ Jung-Ae K，Chang-Suk K，Sang Y，et al．Phosphorylated glucosamine inhibits the inflammatory response in LPS-stimulated PMA-differentiated THP-1 cells 潘华新，王培训，周联，等．清热、活血类中药有效成分对THP-1巨噬泡沫细胞形成及分泌IL-1β、TNF-α的影响
同类课题研究水平概述
- 1.1冰片抗炎活性的研究现状 夏忠玉等研究发现口服冰片能明显抑制巴豆油引起的小鼠耳肿胀及醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增加，明显延长热刺激引起小鼠痛反应时间，减少化学刺激引起的小鼠扭体次数。孙晓萍等研究发现采用冰片治疗，抗足跖肿胀作用在30-60min内达到效应高峰2-4h中效应并不明显，推测与冰片抑制炎症前期的炎症介质有关，而对热板法致痛的镇痛效应较之扭体法作用更为明显，推测冰片的镇痛机制在于外周镇痛，可能与抑制炎性介质有关，但并未深入研究。何晓静等研究发现冰片可抑制大鼠脑缺血再灌注损伤时IL-1β及TNF-α等炎症因子的表达，推测冰片对脑缺血再灌注损伤后急性炎症反应的抑制作用可能是其发挥脑保护作用的重要机制之一。Juhas等亦发现冰片可使TNBS诱导的ICR小鼠表达IL-1 β、IL-6 及TNF-α等细胞因子的mRNA的量明显减少。 1.2THP-1细胞炎症模型及TNF-α测定方法的研究现状 目前常用于细胞抗炎活性药理实验的细胞有人THP-1细胞株、小鼠RAW 264.7细胞株、小鼠腹腔巨噬细胞等。考虑到采用人类细胞进行疾病研究比动物细胞更好，故许多文献报道运用THP-1细胞来进行药物抗炎活性研究。THP-1细胞， 经PMA诱导后，可分化为巨噬细胞，以LPS刺激巨噬细胞可建立细胞炎症模型，促进其细胞分泌TNF-α及IL-1。 L929细胞株检测法是检测TNF-α的常用方法之一。该法以靶细胞杀伤作用为原理，具有高敏感性，特异性较免疫学检测法低，可能受其他物质的干扰，但通过实验设计可尽可能消除干扰，结果可靠，被广泛应用于国内外免疫及炎症药理等实验中。葛迎春等以LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞，并分别以小鼠胸腺细胞增殖法测定培养上清液中IL-1的含量，以L929细胞株检测法测定培养上清液中TNF-α的量，结果显示L929细胞株在TNF-α的测定中基本不受IL-1的影响。王文良等以L929细胞株检测法及ELISA方法检测THP-1细胞TNF-α的分泌量时，通过相关性比较发现L929细胞株检测法测定TNF-α的结果与ELISA法测定结果一致。故可通过L929细胞株检测法半定量地反映出LPS诱导的THP-1细胞TNF-α的分泌量。
