基本信息
- 项目名称：
- 芳香避秽类中药抗流感病毒的筛选研究
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 中医自古有“芳香避秽”的疗法。中医理论认为，气味可通口、鼻等孔窍入体内，调脏腑，祛病强身。现代研究也证实：芳香气味可促进免疫球蛋白的产生，增强抵抗力，也能调节新陈代谢。本课题据此中医理论，选用古籍常用的广藿香、野菊花、防风等五味药为对象，进行抗流感病毒的筛选研究，并对其不同提取部位进行抗流感病毒有效部位筛选研究。本项目的实施，将提供应对流感危机的现代中药，为中药防治流感提供科学的依据。
- 详细介绍：
- 一、前言 流感在全球范围内迅速传播，已成当前第一大传染性疾病，它的防治是我们当前面临的最大问题之一 ，有的化学药品虽有疗效，但毒副作用大，而中药是多成分、多途径和多靶点的作用，且毒副作用小，因此，中药治疗流感有着独特优势 。而中医自古便有“芳香辟秽” 的治疗方法。中医理论认为， 气味可以通过口、鼻、皮毛等孔窍进入体内，进而影响五脏的功能。芳香宜人的气味可以平衡气血，调和脏腑，祛病强身。现代研究也证实：芳香宜人的气味分子可以促进人体免疫球蛋白的产生，增强身体抵抗力，同时能调节全身新陈代谢，平衡神经功能。本课题根据这一中医理论，选用古籍中常用的广藿香、野菊花、防风、佩兰等五味芳香类药物为研究对象，进行抗流感病毒作用的筛选研究，并对具有抗流感病毒作用的中药的不同提取部位进行抗流感病毒有效部位的研究，筛选出其有效部位。 本课题在“芳香避秽”的中医药理论指导下，用现代的技术和方法，体内筛选出具有抗流感病毒作用的芳香性中药，并对具有抗流感病毒的芳香性中药的不同提取部位进行有效部位的体内抗流感病毒的筛选。 二、研究方案 1．研究目标、研究内容和拟解决的关键问题 1.1 研究内容及目标 本课题根据这“芳香辟秽”一中医理论，选用古籍中常用的广藿香、野菊花、防风、佩兰等五味芳香类药物为研究对象，进行抗流感病毒作用的筛选研究，并对具有抗流感病毒作用的中药的不同提取部位进行抗流感病毒有效部位的研究，筛选出其有效部位。 2．拟采取的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析 2.1芳香性中药的抗病毒的筛选 2.1.1受试药物 广藿香、野菊花、防风、佩兰、莪术,病毒唑。 2.1.2 实验动物 NIH小鼠，SPF级，雌雄各半，体重13-15g。饲养环境：室温232℃，相对湿度为7510%。 2.1.3 实验病毒 甲1型流感病毒鼠肺适应株由广州中医药大学热研所病毒室提供，给小鼠增强毒力后，于鸡胚尿囊腔传代2次。并测定其半数致死量，-70℃保存，用前流水浸融。 2.1.4实验仪器 Sanyo日本；精密电子分析天平，FA/JA系列，上海良平仪器仪表有限公司；乙醚，天津化学试剂有限公司；0.9%生理盐水，开开缘生物制药有限公司；平皿、解剖剪，眼科镊，一次性注射器等。 2.1.五味芳香类中药体内抗H1N1流感病毒的筛选研究 （1）五味芳香类中药对小鼠H1N1流感病毒性肺炎的影响 将小鼠随机分成正常对照组、阳性药物组（病毒唑）、病毒对照组（即模型组）、广藿香提取物组、野菊花提取物组，防风提取物组、佩兰提取物组、莪术提取物组，除正常对照组外，每组10只。各组小鼠用乙醚轻度麻醉，选用甲1型流感病毒鼠肺适应株15个LD50 病毒浓度，滴鼻感染小鼠，每只4滴，约0.05 mL。从感染前1 d开始按0.1 mL/10g的剂量灌胃给药，每天1次，连续4 d，病毒感染对照组以等体积蒸馏水灌胃。第5天称取小鼠体重后解剖，肉眼观察肺部病变，记录肺部肝样实变的程度，摘取全肺称重，与体重计算肺指数值，并求出肺指数与抑制率。 肺指数=（鼠肺重/小鼠体重）*100% 肺指数抑制率=（对照组平均肺指数-实验组平均肺指数）/对照组平均肺指数*100%。 （2）五味芳香类中药对H1N1型流感病毒小鼠的死亡保护实验 把小鼠随机分成阳性药物组（病毒唑）、病毒对照组（即模型组）、广藿香提取物组、野菊花提取物组，防风提取物组、佩兰提取物组、莪术提取物组，每组15只。各组小鼠用乙醚轻度麻醉，选用甲1型流感病毒鼠肺适应株5个LD50 病毒浓度，滴鼻感染小鼠，每只4滴，约0.05 mL。从感染前1d开始按0.1 mL/10g的剂量灌胃给药，每天1次，连续12d，病毒感染对照组以等体积蒸馏水灌胃。逐日观察动物发病症状与死亡数，共观察15d。计算死亡率、保护率、平均存活天数及生命延长率。 死亡保护率=（病毒对照组死亡率—死亡组死亡率）/病毒对照组死亡率*100% 生命延长率=（试验组平均存活天数—-病毒对照组平均存活天数）/病毒对照组平均存活天数*100% 2.1.6具有体内抗H1N1流感病毒的中药有效部位的筛选研究 （1）样品的制备 对具有抗H1N1型流感病毒的芳香性的中药的不同提取部位进行体内的抗病毒的筛选，优选药材，利用 SFE-CO2工艺抽提脂溶性成分 A，；用乙醇作夹带剂改变 SFE-CO2工艺条件抽提脂溶性成分 B，药渣用水超声提取后再用冻干制粉得水溶性成分 C。 （2）不同提取部分对小鼠H1N1流感病毒性肺炎的影响 将小鼠随机分成正常对照组、阳性药物组（病毒唑）、病毒对照组（即模型组）、提取物A组、提取物B组，提取物C组，除正常对照组外，每组10只。各组小鼠用乙醚轻度麻醉，选用甲1型流感病毒鼠肺适应株15个LD50 病毒浓度，滴鼻感染小鼠，每只4滴，约0.05 mL。从感染前1 d开始按0.1 mL/10g的剂量灌胃给药，每天1次，连续4 d，病毒感染对照组以等体积蒸馏水灌胃。第5天称取小鼠体重后解剖，肉眼观察肺部病变，记录肺部肝样实变的程度，摘取全肺称重，与体重计算肺指数值，并求出肺指数与抑制率。 （3）不同提取部分对H1N1型流感病毒小鼠的死亡保护实验 小鼠随机分成正常对照组、阳性药物组（病毒唑）、病毒对照组（即模型组）、提取物A组、提取物B组，提取物C组，每组15只。各组小鼠用乙醚轻度麻醉，选用甲1型流感病毒鼠肺适应株5个LD50 病毒浓度，滴鼻感染小鼠，每只4滴，约0.05 mL。从感染前1d开始按0.1 mL/10g的剂量灌胃给药，每天1次，连续12d，病毒感染对照组以等体积蒸馏水灌胃。逐日观察动物发病症状与死亡数，共观察15d。计算死亡率、保护率、平均存活天数及生命延长率。 2.3可行性分析 2.3.1岭南被历代医家称为“障疫之地”,寻求一种有效，简单的抗病毒方法十分必要 芳香性味中药常用于中药胶囊或者煎剂，用来治疗因病毒而引起的流行性感冒，更能达到防治疾病的作用；而现在大多数医院的室内消毒不仅运用现代的紫外消毒和化学消毒外，更有用芳香药物，如苍术烟熏防治细菌、病毒。本课题主要进行芳香味药物的抗病毒的筛选，这对今后的防治医学范畴应该会起到积极性的作用。 2.3.2岭南医家一直致力于研究抗病毒研究，积累了丰富的临床经验 南粤一直以来都是世界流感流行的疫源之一，2003年的第一例非典型肺炎（SARS）在广东首次发下，2005年禽流感首次感染人类发生在香港，在于病毒做持久站的岭南医家，在抗病毒研究领域有着丰富的临床用药经验，形成了一整套独特的抗病毒体系。本次研究所用的芳香药物，一直以来都被多数医家关注，而且组方疗效确切。 2.3.3广州中医药大学新药中心申报了多个抗流感病毒的专利，有条件落实本项研究的具体项目 广州中医药大学新药中心一直以来专注于抗病毒的研究，以建立完善的体内、体外的病毒筛选方法，可以为本次研究提供必要的技术与理论支持。
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撰写目的和基本思路
- 通过查阅古籍和相关文献及借鉴现代医家对防治流感病毒的经验，选择常用于防治流感病毒的具有芳香性中药为研究对象，用超临界萃取等方法进行提取，得到芳香药物的不同提取部位，采用体内抗病毒筛选实验方法，筛选出具有抗流感病毒作用的有效部位。课题的主要目的是为深入研究中药抗流感病毒的作用机制奠定基础，为中药安全、科学的应用于防治流感提供科学依据，实现中药的现代化。
科学性、先进性及独特之处
- 以“芳香辟秽”中医药理论为指导，用超临界萃取等科学方法和先进仪器，选芳香药物不同提取部位进行抗病毒研究，筛选出有效部位。根据古籍记载和现代医家防治流感的经验，选常用芳香性中药来研究，使实验具有可行性，且此次研究可作为有效部位体内筛选的模板，且中药有多成分、多途径和多靶点的作用，毒副作用小，因此，中药治疗流感有着独特优势。
应用价值和现实意义
- 岭南被历代医家称为“障疫之地”,寻求一种有效，简单的抗病毒方法十分必要。芳香性中药抗病毒疗效确切，不仅能治疗流行性感冒，更能防治疾病；化学药虽疗效好，但毒副作用大，而中药是多成分、多途径和多靶点作用，且毒副作用小，因此中药治疗流感有独特优势 。本课题对芳香味药物进行筛选，筛选出广藿香和野菊花的有效部位；本项目的实施，将提供应对流感危机的现代中药，为中药安全、科学的应用于防治流感提供科学依据。
学术论文摘要
- 目的：对广藿香、野菊花、防风、佩兰、莪术五味芳香类中药进行抗H1N1流感病毒的筛选研究，并对筛选出具有抗H1N1流感病毒中药的不同提取部位进行有效部位研究。方法：通过建立小鼠H1N1流感病毒性肺炎模型和小鼠死亡模型，筛选出广藿香、野菊花、防风等五味药芳香类中药中具有抗流感病毒作用的中药，并研究具有抗流感病毒中药的不同提取部位对小鼠肺指数和死亡保护的影响，确定抗流感病毒的有效部位。结果：与病毒对照组比较，广藿香能明显降低H1N1流感病毒感染小鼠肺指数（P<0.01）、野菊花能降低H1N1流感病毒感染小鼠肺指数（P<0.05），其他几味中药作用不显著。不同提取部位的研究中，广藿香提取物A (广藿香油部位)和野菊花提取物A能显著降低H1N1流感病毒感染小鼠肺指数（P<0.01）；广藿香提取物A (广藿香油部位)能显著延长生存时间（P<0.01），广藿香提取物B、野菊花提取物A能延长生存时间（P<0.05），其余各组均能延长生存时间，但与正常对照组比较无明显差异。结论：广藿香提取物A(广藿香油部位)、广藿香提取物B和野菊花提取物A具有一定的抗H1N1流感病毒的作用。
获奖情况
- 2011年，《广藿香不同提取部位体内抗流感病毒作用研究》发表在《时珍国医国药》杂志上。
鉴定结果
- 本课题筛选出广藿香和野菊花具有抗流感病毒作用，并对其不同提取部位进行抗流感病毒研究，筛选出广藿香提取物A(广藿香油部位)、广藿香提取物B和野菊花提取物A具有抗流感病毒的作用。
参考文献
- [1].任守忠，靳德军，张俊清，等. 广藿香药理作用研究进展[J].中国现代中药，2006,8（8）：27. [2]严银芳等.石香薷挥发油对流感病毒的抑制作用[J]. 微生物学杂志2002年1月第22卷第1期. [3]夏泉等. 莪术油抗流感病毒和呼吸道合胞病毒作用的实验研究[J]. 中国药理学通报, 2004年03月20日（3）. [4]胡兴昌,郑伟强．板蓝根粗提液抑制流感病毒的实验研究[J]．上海师范大学学报(自然科学版)，2003，32(1)：62． [5]胡克杰,孙考祥，王璐,等．绿原酸体外抗病毒作用研究[J]．哈尔滨医科大学学报，2001，35(6)：430．
同类课题研究水平概述
- 目前抗流感病毒药物分为两类：一是临床常用的抗流感病毒西药。其又包括了M2离子通道蛋白抑制剂和神经氨酸酶(NA)抑制剂。M2离子通道蛋白抑制剂是长期以来惟一的一类抗流感病毒药物，包括1966年上市的金刚和1987年上市的金刚乙胺。金刚烷胺和金刚乙胺可以通过阻断M2离子通道蛋白阻止病毒脱壳，使病毒RNA不能释放到细胞质中，病毒的早期复制被中断，从而起到抗流感病毒的作用。神经氨酸酶(NA)抑制剂20世纪70年代发现了流感A和B型病毒NA的晶体结构，直到1983年才首次公布了流感A和B各亚型病毒NA的共有保守序列，继而通过计算机辅助设计，成功的合成出2个NA抑制剂扎那米韦和奥司他，两药于1999年几乎同时上市，为漫长的抗流感病毒药物研究开创了新纪元。其优点在于高效、低毒、极少产生耐药性，而且对A和B各亚型流感病毒均有效。扎那米韦与奥司他韦都为唾液酸类似物，以酶和底物的作用形式与NA中的保守序列结合而使NA失活。盐酸吗琳胍(病毒灵)，利巴韦林(病毒唑)和阿比朵尔也是我国临床常用的抗流感病毒药物。二是抗流感病毒的中药。其又包括了抗流感病毒的单味中药和复方中药或中成药。抗流感病毒的单味中药研究大多数为清热解毒类中药，所含成分复杂，目前已经研究比较清楚的成分主要有两类：一类是多酚类物质，不仅可以抑制流感病毒蛋白质和RNA合成，同时也可抑制流感病毒的吸附作用；另一类是黄酮类物质，它能够抑制流感病毒唾液酸酶的活性和抑制膜融合作用。胡兴昌等用丙酮脱脂提取板蓝根生药的凝集素对流感病毒进行的体外抑制试验结果表明，板蓝根凝集素对流感病毒具有显著的直接杀灭作用和预防作用及较好的治疗用，并且抑制流感病毒的效果与板蓝根凝集素血凝活性的高低相关。柴胡对鸡胚内流感病毒的增殖有显著抑制作用。 但目前对芳香类药物的挥发油成分治疗流感的研究并不多：倪文澎等人研究发现荆芥穗挥发油具有抗甲型流感病毒的作用。 麻叶千里光挥发油对呼吸道合胞病毒和单纯疱疹病毒I型有显著抑制作用，能不同程度地延缓副流感病毒、柯萨奇病毒B、腺病毒Ⅲ型和流感病毒致细胞病变作用。陈建伟等人的实验以甲型流感病毒滴鼻感染小鼠，观察神术散及其组成药味的不同提取物对甲型流感病毒感染小鼠的保护作用。严银芳等人通过体内外试验证明石香薷挥发油对流感病毒的抑制作用。 夏泉等通过体内,外实验研究莪术油抗流感病毒和呼吸道合胞病毒的作用。
