基本信息
- 项目名称：
- 猪卵母细胞孤雌激活中电激活参数及培养体系的研究
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 作品对猪卵母细胞孤雌激活参数和培养液对孤雌胚胎发育的影响进行了研究，实验中设定了不同脉冲电压，脉冲持续时间，脉冲次数，对体外成熟卵母细胞进行电激活，采用了PZM3和NCSU23培养液体外培养孤雌激活胚胎，对比不同电激活参数和培养液对猪卵母细胞的影响。综上所述，在脉冲电压为150v/mm、脉冲持续时间为100µs，脉冲次数为1次的电激活条件下，猪卵母细胞孤雌激活的效果最佳。
- 详细介绍：
- 本研究为优化电激活和胚胎培养的相关技术体系，开展了电激活参数和培养液对猪卵母细胞孤雌胚胎发育的影响研究。结果表明，在脉冲持续时间和脉冲次数恒定的条件下，脉冲电压150v/mm组的囊胚率显著高于100v/mm组和125v/mm组（P<0.05）；在脉冲电压和脉冲次数恒定的条件下，脉冲持续时间为100µs时囊胚率显著高于其它两组（P<0.05），达50.5%；在脉冲电压和脉冲持续时间恒定的条件下，1次脉冲的卵裂率和囊胚率显著高于2次脉冲（P<0.05）；PZM3和NCSU23培养液对猪孤雌激活胚胎发育的影响差异不显著（P＞0.05），但PZM3培养液组的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数均略高于NCSU23组。综上所述，在脉冲电压为150v/mm、脉冲持续时间为100µs，脉冲次数为1次的电激活条件下，猪卵母细胞孤雌激活的效果最佳。
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作品专业信息
撰写目的和基本思路
- 作品对猪卵母细胞孤雌激活参数和培养液对孤雌胚胎发育的影响进行了研究，目的筛选出较好的猪卵母细胞孤雌激活的条件参数和培养体系，为提高体细胞核移植效率提供技术依据。实验中设定了不同脉冲电压，脉冲持续时间，脉冲次数对体外成熟卵母细胞进行电激活，采用了PZM3和NCSU23培养液体外培养孤雌激活胚胎，对比不同电激活参数和培养液对猪卵母细胞的影响。
科学性、先进性及独特之处
- 猪卵母细胞孤雌激活受多个方面因素的影响，主要受激活方法、体外培养体系和激活剂的控制。近几年来国内外有很多的研究报道，对比了不同激活方法、不同体外培养体系及在培养液中添加不同的成分对猪卵母细胞孤雌激活、体细胞核移植的影响。本作品从电激活参数、体外培养体系方面优化猪卵母细胞孤雌激活相关技术体系。
应用价值和现实意义
- 激活处理及培养体系对胚胎的后期发育非常关键，也是猪体细胞核移植技术所要解决的难点之一，有许多问题亟待解决，重构胚的激活及培养体系等很多因素影响猪核移植技术的效率。本作品开展了电激活参数和培养液对猪卵母细胞孤雌胚胎发育的影响研究，优化电激活和胚胎培养的相关技术体系，为核移植等研究奠定了基础。
学术论文摘要
- [1]戴建军，吴华莉，张廷宇，等. 猪体细胞克隆胚的胚胎移植研究[J]. 上海农业学报. 2007(04). [2] 潘登科.影响猪体细胞克隆胚胎发育能力的因素研究[D].中国农业大学,2005 [3]孙兴参,岳奎忠,罗明久,等.猪卵母细胞孤雌激活方法及影响因素的研究.中国农业科学,2004,37:431-435. [4] 马育芳，卫恒习，李燕等.化学激活和季节对克隆猪出生率的影响.中国科学C辑:生命科学,2009,39(4):384-391. [5]史文军.猪胚胎移植时间与胚胎生长发育关系的探讨[J].河南畜牧兽医,2005,12:7-8. [6]叶华虎,魏泓,陈紧顾.猪卵母细胞在不同培养液中成熟后的发育能力[J].第三军医大学报,2003,25(6):511-513. [7]叶华虎,魏泓,陈紧顾.猪卵母细胞在不同培养液中成熟后的发育能力[J].第三军医大学报,2003,25(6):511-513. [8]张运海.利用体细胞核移植技术生产猪克隆胚胎的研究[D]．北京:中国农业大学,2005.
获奖情况
- 2011年5月在云南农业大学第九届“挑战杯”荣获校级二等奖。 2011年6月荣获第六届云南高校青年学术科技节三等奖。
鉴定结果
- 无
参考文献
- [1]戴建军，吴华莉，张廷宇，等. 猪体细胞克隆胚的胚胎移植研究[J]. 上海农业学报. 2007(04). [2] 潘登科.影响猪体细胞克隆胚胎发育能力的因素研究[D].中国农业大学,2005 [3]孙兴参,岳奎忠,罗明久,等.猪卵母细胞孤雌激活方法及影响因素的研究.中国农业科学,2004,37:431-435. [4] 马育芳，卫恒习，李燕等.化学激活和季节对克隆猪出生率的影响.中国科学C辑:生命科学,2009,39(4):384-391. [5]史文军.猪胚胎移植时间与胚胎生长发育关系的探讨[J].河南畜牧兽医,2005,12:7-8. [6]叶华虎,魏泓,陈紧顾.猪卵母细胞在不同培养液中成熟后的发育能力[J].第三军医大学报,2003,25(6):511-513. [7]叶华虎,魏泓,陈紧顾.猪卵母细胞在不同培养液中成熟后的发育能力[J].第三军医大学报,2003,25(6):511-513. [8]张运海.利用体细胞核移植技术生产猪克隆胚胎的研究[D]．北京:中国农业大学,2005. [9]王媛,孙爽,刘仲凤等.猪植入前胚胎体外培养条件的优化.中国畜牧兽医,2009,36（11）:89-93.
同类课题研究水平概述
- 猪卵母细胞孤雌激活受多个方面因素的影响，主要受激活方法、体外培养体系和激活剂的控制，不同的激活方法、体外培养体系、激活剂的选择，对卵母细胞的孤雌激活率、卵裂率及孤雌发育率均有较大程度的影响。近几年来国内外有很多的研究报道，对比了不同激活方法[1-4]（化学激活、电激活、电激活联合化学激活）、不同体外培养体系[5-9]（NCSU23、BECM3和PZM系列）及在培养液中添加不同的成分(生物大分子)[10-12]（胰岛素、维生素E、FBS、葡萄糖等）对猪卵母细胞孤雌激活、体细胞核移植的影响。这些研究优化了孤雌激活方法及培养体系，但其中对一些问题的看法并不一致，如对激活方法、培养基选择。 电激活所用的仪器型号和各实验室条件不同，其激活核移植胚所用参数差异也较大。Koo等[13]的研究表明采用120v/mm电场强度，30µs脉冲激活核移植卵母细胞，其囊胚发育率高于150v/mm电压，30µs脉冲。赵浩斌等[14]]的研究表明电场强度为125v/mm、脉冲时程为40-60µs，对于猪体外成熟卵母细胞的激活效果最好，1次脉冲激活率可达80％，增加脉冲次数并不能显著提高激活率。李光鹏等[15]的研究表明电场强度为150v/mm、脉冲时程为30µs时对于猪体外成熟卵母细胞的激活效果最好，1次脉冲激活率可达71％。本研究结果表明，脉冲电压为150V/mm、脉冲持续时间为100μs、脉冲次数为1次对猪卵母细胞孤雌激活胚胎的发育效果最好，这与Onishi A等[17]，Kure-bayashi等[18]的研究结果相一致。各实验室采用的电激活参数不同，可能是由于实验设备、实验条件的差异导致的。 North Carolina University 23 Medium（NCSU23）和Porcine Zygote Medium-3（PZM3）是猪胚胎体外培养较为成功的两种培养基，利用这两种培养基均获得了克隆后代[17,19,20]。NCSU23为学界公认的效果确切和稳定的猪胚胎培养基，PZM3是近年来新发展起来的培养基，更接近于猪体内的生理环境，两种培养基对猪胚胎体外培养效果有不同的说法[6-9]。本研究中PZM3和NCSU23培养液对猪卵母细胞孤雌激活胚胎的发育影响没有明显的差异。
