基本信息
- 项目名称：
- 透骨消痛胶囊含药血清影响兔软骨细胞CyclinD1 mRNA表达的研究
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 通过MTT、RT-PCR法分别检测不同剂量透骨消痛胶囊干预后兔软骨细胞的增殖和CyclinD1 mRNA表达情况。得出结果：MTT、RT-PCR法检测分别显示含药血清能促进软骨细胞的增殖和CyclinD1 mRNA表达， 结论：透骨消痛胶囊含药血清能促进软骨细胞G1期正性调节因子CyclinD1 mRNA表达，从而促进软骨细胞增殖。
- 详细介绍：
- 本研究是在中医药理论的指导下，运用细胞生物学的研究方法,在前期临床、实验研究的基础上，观察不同剂量透骨消痛胶囊含药血清对兔软骨细胞CyclinD1 mRNA表达的影响，旨在从细胞水平探讨透骨消痛胶囊调控软骨细胞增殖的作用机制。 方法：含药血清的制备—软骨细胞培养体系建立—软骨细胞鉴定-透骨消痛胶囊含药血清干预方法—MTT法检测软骨细胞的增殖、RT-PCR法检测软骨细胞CyclinD1 mRNA的表达—统计学处理。 结果：MTT法检测显示含药血清能够促进软骨细胞的增殖，实验2组、实验3组，干预72h软骨细胞OD值显著高于对照组（P<0.01），明显高于实验1组（P<0.05）; RT-PCR法检测显示含药血清能够促进软骨细胞CyclinD1 mRNA表达，实验2组、实验3组，干预72h软骨细胞CyclinD1 mRNA表达显著高于对照组（P<0.01），明显高于实验1组（P<0.05）。 结论：透骨消痛胶囊含药血清能促进软骨细胞G1期正性调节因子CyclinD1 mRNA表达，从而促进软骨细胞增殖。 分别
作品专业信息
撰写目的和基本思路
- 目的：探讨透骨消痛胶囊含药血清对兔软骨细胞CyclinD1 mRNA表达的影响。 基本思路：取兔膝关节软骨，Ⅱ型胶原酶消化，建立体外培养体系，甲苯胺蓝染色鉴定细胞功能，体外培养第三代软骨细胞随机分为对照组、实验1、2、3组，分别加20%的空白血清、透骨消痛胶囊含药血清低、中、高剂量继续培养72h，MTT检测细胞增殖，RT-PCR检测细胞CyclinD1 mRNA表达，透射电子显微镜观察细胞形态。
科学性、先进性及独特之处
- （1）首次采用透骨消痛胶囊有效成分组对体外培养的永生化软骨细胞周期正性调节因子CyclinD1 mRNA表达影响的研究。 （2）本作品的研究能为透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎（Osteoarthritis,OA）提供依据，并阐释其分子机制。
应用价值和现实意义
- 本项目采用透骨消痛胶囊血清为受试药物，通过含药血清作用于体外培养的软骨细胞，从细胞水平来探索关节软骨生物学特性，从而模拟了透骨消痛胶囊在体内发生作用的过程，结果表明透骨消痛胶囊含药血清能促进软骨细胞G1期正性调节因子CyclinD1表达，从而促进软骨细胞增殖。为探索中药对骨性关节炎（Osteoarthritis,OA）作用环节提供了有效而简便的方法。具有良好的推广前景。
学术论文摘要
- [摘要] 目的：探讨透骨消痛胶囊含药血清对兔软骨细胞CyclinD1 mRNA表达的影响。方法：取4周龄雄性新西兰大白兔膝关节软骨，Ⅱ型胶原酶消化，建立软骨细胞体外培养体系，甲苯胺蓝染色鉴定细胞功能，体外培养第三代软骨细胞随机分为对照组、实验1组、实验2组、实验3组，分别加入20%的空白血清、透骨消痛胶囊含药血清低、中、高剂量继续培养72h后，MTT法检测软骨细胞增殖，RT-PCR法检测软骨细胞CyclinD1 mRNA表达，透射电子显微镜观察软骨细胞形态。结果：实验2组、实验3组，干预72h软骨细胞OD值显著高于对照组（P<0.01），明显高于实验1组（P<0.05）;实验2组、实验3组，干预72h软骨细胞CyclinD1 mRNA表达显著高于对照组（P<0.01），明显高于实验1组（P<0.05）。结论：透骨消痛胶囊含药血清能促进软骨细胞G1期正性调节因子CyclinD1 mRNA表达，从而促进软骨细胞增殖。 [关键词] 透骨消痛胶囊 含药血清 软骨细胞 CyclinD1 mRNA
获奖情况
- 无
鉴定结果
- 情况属实
参考文献
- 参考文献(更多的参考文献见论文） 1 徐淑云,卞如濂,陈修.药理实验学方法[M].第3版. 北京：人民卫生出版社,2002：202. 2 田代真一,“药物血清学”と“血清药化学”一汉方の药理学か始きっ药物血中浓度测定の新しぃ世界.TDM研究,1988,54(5)：11. 3 叶蕻芝，李西海，梁文娜，等.软骨细胞体外分离培养与鉴定的实验研究，福建中医学院学报2008，18（6）：33-36. 4 刘献祥,李西海,周江涛. 改良Hulth造模法复制膝骨性关节炎的实验研究.中国中西医结合杂志,2005,25 (12):1104. 5 Hulit J,Lee RJ,Russell RG,et a1．ErbB-2-induced mammary tumor growth：the role of cyclinD1 and p27kipl．Biochemist Pharma col,2002,64:827-836. 6 李西海,梁文娜,刘献祥,等.端粒和端粒酶与永生化软骨细胞[J].国际骨科学杂志,2007,28（6）：35. 7 张勇，赵建宁.组织工程软骨细胞体外培养技术要点.中国组织研究与临床康复，2008,12（24）：8340-8343.
同类课题研究水平概述
- “骨与关节十年（bone and joint decade）”这一世界范围内活动表明了研究和治疗OA的重要性和必要性。目前，西医采用非甾体抗炎药、抗氧化药物、局部关节腔内注射药物及外科手术等多种方式，但这些治疗方式副作用大，价格昂贵，且远期疗效不肯定。现代研究表明，中药是通过多成分、多靶点的整合调节作用，对于解决慢性复杂多因素疾病的治疗问题具有单体药物无法比拟的优势。因此，深入研究OA的发病机制为开发治疗OA的中药复方尤其显得意义重大。 Cyclin D1是G1期细胞增殖信号的关键调控蛋白，在细胞增殖过程中具有重要的作用，Cyclin D1与CDK的结合是细胞周期关键限速点G1/S期切换的正向调节因子，细胞一旦通过该点，就会不再依赖外源性增殖分裂信号的刺激，而能自主完成细胞的增殖周期。在正常细胞周期中，Cyclin D1与CDK4形成复合物Cyclin D1-CDK4，能磷酸化视网膜母细胞瘤易感因子(Rb)蛋白，磷酸化Rb的构象变化而导致转录活化因子(E2F)的分离，并释放E2F，发挥转录因子的生物学效应，解除Rb调控G1期的停滞作用，启动DNA的合成，使细胞周期从G1期顺利进入S期，从而实现细胞增殖，抑制细胞凋亡。因此，Cyclin D1在软骨细胞周期调控中起着重要的作用。 透骨消痛胶囊由巴戟天、杭白芍、川芎、肿节风等组成(460mg/粒，1g药粉含13g生药，批准文号：闽制字Z20100006),福建中医药大学附属第二人民医院院内制剂。该方长期运用于临床，是防治骨性关节炎行之有效的组方。方中以巴戟天补肾之品治本为君药；白芍养血柔肝以助固本为臣药；川芎活血行血、血行风自灭，肿节风祛风除湿、风祛痹痛止，为佐使药，具有补肾柔肝，活血祛风的功效。前期研究表明透骨消痛胶囊具有有效抑制细胞因子、MMP-3、氧自由基的生物学效应来延缓关节宏观形态、软骨基质及软骨细胞退变的作用。而从软骨细胞CyclinD1 mRNA表达角度探讨透骨消痛胶囊作用机制未见报道。 因此，本课题通过探讨透骨消痛胶囊对软骨细胞CyclinD1 mRNA表达的影响，证实了透骨消痛胶囊干预软骨细胞的有效性，具有促进软骨细胞增殖的作用，从而为中药防治骨性关节炎提供新线索。
