基本信息
- 项目名称：
- 反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞HO-8910的抑制作用
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 依据与miRNA序列互补的原理，设计反义寡核苷酸，人工合成并全硫代修饰，在LipofectamineTM 2000介导下，转染卵巢癌HO-8910细胞。采用台盼蓝拒染法检测其对细胞生长抑制的作用和最佳作用浓度。 结果显示反义寡核苷酸有效抑制细胞生长，作用的最佳浓度是0.3μmol／L,同时也显示从转染卵巢癌HO-8910细胞24 h开始，反义寡核苷酸组细胞生长明显受到抑制，抑制效应持续到72h。
- 详细介绍：
- MicroRNA是新近发现的一类内源性小分子RNA家族，主要作用于基因转录后水平，对生物体诸多生命现象起重要的调控作用，特别是在肿瘤的发病机制中发挥重要作用，发挥着类似癌基因或抑癌基因的功能.miRNAs普遍存在于真核细胞中, 进化上高度保守, 是一类约22 nt的内源性单链RNA分子, 作用于靶mRNA导致其降解或抑制其翻译, 在动物和植物中均对基因表达起重要的负调控作用。因此我们检测了以microRNA-30b为靶标的反义寡核苷酸(anti-miRNA oligonucleotide，AMO)对人卵巢癌细胞HO-8910的生长抑制效应，为卵巢癌的miRNA干扰治疗的新靶标提供实验依据。 依据与miRNA序列互补的原理，设计反义寡核苷酸，人工合成并全硫代修饰，在LipofectamineTM 2000介导下，转染卵巢癌HO-8910细胞。采用台盼蓝拒染法检测其对细胞生长抑制的作用和最佳作用浓度。结果显示反义寡核苷酸有效抑制细胞生长，分别与随机组、空白对照组、脂质体对照组进行比较有显著差异(P<0．05)，反义寡核苷酸作用的最佳浓度是0.3μmol／L。台盼蓝拒染法结果也显示从转染卵巢癌HO-8910细胞24 h开始，反义寡核苷酸组细胞生长明显受到抑制，抑制效应持续到72h。
作品专业信息
撰写目的和基本思路
- MicroRNA是一类内源性小分子RNA,作用于基因转录后水平,调控基因表达。因众多miRNA在肿瘤细胞中高表达，利用有效抑制基因表达的方法是否会对肿瘤细胞生长产生影响是我们感兴趣的。用反义技术抑制目的基因表达是一种较理想选择。根据现有研究数据，miRNA-30b在卵巢癌细胞中高表达，故设计出针对它的反义寡核苷酸，来作用于卵巢癌HO-8910细胞，观察其对细胞生长抑制作用，以寻找卵巢癌治疗新靶点。
科学性、先进性及独特之处
- 科学性:通过研究对microRNA-30b的反义寡核苷酸序列设计与合成,用来作用于卵巢癌HO-8910细胞，观察其对细胞生长抑制,符合科学研究规范。先进性:以卵巢癌中高表达的miRNA-30b为研究对象，是迄今首次在卵巢癌 细胞中观察其对细胞生长抑制。独特性:通过对miRNA-30b的反义寡核苷酸序列设计与合成，探讨其在卵巢癌中功能。为进一步了解其在肿瘤发生、发展及预后中所起作用提供实验依据。
应用价值和现实意义
- miRNA与多种肿瘤发生密切相关。有的有抑癌作用，有的则有促癌功能。miRNA在各种肿瘤中表达水平不同，且不同肿瘤中有特定表达模式，说明肿瘤发生与其表达存在相关性，并在肿瘤治疗中有重要作用及良好前景。以miRNA为靶点设计的基因药物可以为肿瘤基因治疗提供一条新途径，这既是一项筛选抗肿瘤反义核酸药物的技术，也是探讨其在卵巢癌中功能的重要手段，为进一步了解其在肿瘤发生、发展及预后中所起作用奠定基础。
学术论文摘要
- 目的：探讨以miRNA-30b为靶标的反义寡核苷酸AMO对卵巢癌HO-8910细胞生长抑制效应。方法：依据与miRNA序列互补原理设计AMO，人工合成并全硫代修饰，在LipofectamineTM2000介导下，转染卵巢癌细胞。用台盼蓝拒染检测其对细胞生长抑制作用和最佳作用浓度。结果：染色结果显示AMO有效抑制细胞生长，分别与随机组、空白组、脂质体组进行比较有显著差异P小于0．05，AMO作用的最佳浓度是0.3μmol每升，也显示从转染卵巢癌细胞24 h开始，AMO组细胞生长明显受到抑制，抑制效应持续到72h。结论：以miRNA-30b为靶标的AMO可有效抑制卵巢癌细胞生长。
获奖情况
- 2011年4月在大连医科大学第五届大学生课外学术科技作品大赛中获得三等奖
鉴定结果
- 无
参考文献
- [1]David P.Bartel.Cell 2009,136(23):215-233 [2]Schmittgen TD.Cell Mol Med 2008,12(5B):1811-1819 [3]Socct GK,et al. Cancer Res 2006,66(3):1277-1281 [4]Foekens JA,et al.PNAS 2008,105(35):13021-13026 [5]Ramiro Garzon, et al.Blood 2008, 111:3183-3189. [6] Yukiharu Hiyoshi,et al.Clin Cancer Res 2009,15(6):1915-1922 [7] Volinia S,et al.PNAS 2006, 103(7):2257-2261. [8]. Zhang L, et al.PNAS 2006, 103(24): 9136-9141.
同类课题研究水平概述
- 目前，miRNA在卵巢肿瘤的研究尚处于起步阶段。主要包括 miRNA 在卵巢肿瘤的表达检测；miRNA 与卵巢肿瘤的发生、分化、预后的相关性及其机制的研究；以及 miRNA 在卵巢肿瘤的诊断、治疗等应用方面的探索。 基于 miRNA 的卵巢肿瘤治疗，采用以合成的 miRNA 为工具，靶向作用于肿瘤相关基因。 Tsuda 等报道，合成的 miR-14U等3种miRNA（以HER-2 的编码mRNA为靶基因的miRNA）转染入SKOV3细胞后，能抑制 HER-2 蛋白的表达，并有效减少 SKOV3 细胞。后来又发现合成的 Gli-1-miRNA-3548 （以胶质瘤伴随抗原1的编码 mRNA 为靶基因的 miRNA）转染 Gli-1+卵巢肿瘤细胞后，可以阻断Shh（Sonic Hedgehog）信号通路，明显抑制 Gli-1+卵巢肿瘤细胞增殖。这都预示着基于 miRNA 的靶向治疗可能是今后卵巢肿瘤基因治疗的新途径。 正因为如此，本课题通过针对microRNA-30b的反义寡核昔酸序列(AMO)设计与合成，用它来作用于卵巢癌HO-8910细胞，为肿瘤基因治疗提供了一条新途径。这既是一项筛选抗肿瘤反义核酸药物的技术，也是探讨miRNA在卵巢癌中功能的重要手段，为进一步了解其在肿瘤发生、发展及预后中所起的作用奠定基础。
