基本信息
- 项目名称：
- 川芎嗪对人肝癌耐药细胞BEL-7402/ADM中P-gp表达的影响
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 肿瘤多药耐药（MDR）成为肿瘤临床治疗的一大障碍。MDR的机制复杂，目前研究的热点是P-gp介导的MDR。P-gp是一种分子量为170KD的跨膜糖蛋白，它作为药泵在ATP供能的条件下将化疗药物快速蹦出细胞外而产生耐药。川芎嗪（TMP）具有高效低毒的特性，且为钙通道阻滞剂。课题采用TMP作为逆转剂，采用流式细胞术和免疫组化检测TMP对人肝癌耐药细胞BEL-7402/ADM中P-gp表达的影响。
- 详细介绍：
- 目的：观察川芎嗪（TMP）对人肝癌耐药细胞BEL-7402/ADM中P—糖蛋白 ( P-glycoprotein，P-gp)表达的影响，研究TMP对人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/ADM的逆转机制。方法：将人肝癌细胞耐药株BEL-7402/ADM及其亲本细胞BEL-7402分为：亲本组、耐药组、逆转组（耐药+TMP）、阳性对照组（耐药+维拉帕米）、二抗阴性对照组，用免疫组化SABC法和流式细胞术对照观察TMP对BEL-7402/ADM中P-gp表达的影响。结果：流式细胞术结果显示耐药组显著高于亲本组（P<0.01)；耐药+TMP和耐药+维拉帕米（VP）组均显著低于耐药组和亲本组（P<0.01)。免疫组化SABC法显示耐药组P-gp阳性表达率显著高于亲本组（P<0.01)；TMP组，VP组的P-gp阳性表达率显著低于耐药组（P<0.01)。TMP组与VP组比较无显著性差异(P>0.05)。结论：TMP能显著降低人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/ADM细胞表面P-gp的表达，增加了阿霉素等化疗药物对BEL-7402/ADM的细胞毒性作用，从而增加对肿瘤细胞的抑制率，提高化疗疗效。
作品专业信息
撰写目的和基本思路
- 目的：观察川芎嗪对人肝癌耐药细胞BEL-7402/ADM中P-gp表达的影响 思路：将人肝癌细胞耐药株BEL-7402/ADM及其亲本细胞BEL-7402分为：亲本组、耐药组、逆转组（耐药+TMP）、阳性对照组（耐药+维拉帕米）、二抗阴性对照组，用免疫组化SABC法和流式细胞术对照观察TMP对BEL-7402/ADM中P-gp表达的影响。
科学性、先进性及独特之处
- 本课题采用流式细胞术、免疫组化法检测TMP对人肝癌耐药细胞BEL-7402/ ADM中P-gp表达的影响尚未检索到相同报道。
应用价值和现实意义
- 对中药有效成分逆转肿瘤细胞MDR（ Multidrug resistance，MDR）提供了实验模型；为肿瘤的临床治疗提供了实验依据。
学术论文摘要
- 目的：观察川芎嗪（TMP）对人肝癌耐药细胞BEL-7402/ADM中P—糖蛋白 ( P-glycoprotein，P-gp)表达的影响，研究TMP对人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/ADM的逆转机制。方法：将人肝癌细胞耐药株BEL-7402/ADM及其亲本细胞BEL-7402分为：亲本组、耐药组、逆转组（耐药+TMP）、阳性对照组（耐药+维拉帕米）、二抗阴性对照组，用免疫组化SABC法和流式细胞术对照观察TMP对BEL-7402/ADM中P-gp表达的影响。结果：流式细胞术结果显示耐药组显著高于亲本组（P<0.01)；耐药+TMP和耐药+维拉帕米（VP）组均显著低于耐药组和亲本组（P<0.01)。免疫组化SABC法显示耐药组P-gp阳性表达率显著高于亲本组（P<0.01)；TMP组，VP组的P-gp阳性表达率显著低于耐药组（P<0.01)。TMP组与VP组比较无显著性差异(P>0.05)。结论：TMP能显著降低人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/ADM细胞表面P-gp的表达，增加了阿霉素等化疗药物对BEL-7402/ADM的细胞毒性作用，从而增加对肿瘤细胞的抑制率，提高化疗疗效。
获奖情况
- 2010年12月发表于《广东药学院学报》（2010,26（6）：635-638.）； 获得湖北医药学院本科生科研设计大赛二等奖。
鉴定结果
- 暂未鉴定
参考文献
- [1]. Xuan-bin WANG, Jing XU, Shan-shan WANG, Ying LIU, Ming LIU, Hong-liang LI.ABCB and ABCC superfamily members in resistant hepatocellular carcinoma[C].15th World Congress on Advances in Oncology and 13th International Symposium on Molecular Medicine 7-9 October 2010, Hotel Poseidon Resort, Loutraki, Greece. International Journal of Molecular Medicine.2010,26suppl:s12. [2].陈永刚，汪选斌.川芎嗪逆转肿瘤多药耐药的研究进展[J].中国药房，2009，20（21）：1675-1676. [3]. 汪选斌，王姗姗，刘明，桑明.P-糖蛋白介导的肿瘤多药耐药与逆转[J].中国药师，2010,13（12）：1733-1735. [4].刘英,李瑞生,王珊珊,等.川芎嗪对人肝癌耐药细胞Bel-7402/DXR多柔比星蓄积的影响[J].医药导报.2009，28(5):565-567； [5].WANG Xuan-bin,WANG Shan-shan,ZHANG Qiu-fang, et al. Inhibition of Tetramethylpyrazine on P-gp，MRP2，MRP3 and MRP5 in Multidrug Resistant Human Hepatocellular Carcinoma Cells[J].Oncology Reports.2010，23（1）：211-215.
同类课题研究水平概述
- 肿瘤多药耐药(MDR) ，指癌细胞发生对许多结构不相关的化疗药交叉抵抗的现象，它是有效化疗的主要障碍之一。肿瘤多药耐药的机制复杂，有P-糖蛋白( P-glycoprotein， P-gp)表达增高、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein， MRP) 表达增高、肺耐药相关蛋白( lung resistance-associated protein， LRP) 表达增高、GSH，GST表达增多、TOPOⅠ、Ⅱ减少、肿瘤细胞凋亡抑制等原因[1] 。 P-糖蛋白( P-glycoprotein， P-gp)是一种分子量为170KD的跨膜糖蛋白，它在人体里主要由MDR1所编码，在耐药细胞中MDR1基因扩增导致P-gp过量表达，由ATP提供能量将多种化疗药物快速泵出细胞外而使抗肿瘤药物的细胞毒作用降低出现耐药[1] 。其表达水平和细胞膜的通透性、细胞内药物浓度以及耐药程度有关。 目前用于临床的逆转剂主要有环孢素A (CSA) 和异博定(VRP) 等，但其毒性相对较大，患者难以耐受。川芎嗪(Tetremethylpyrazine，TMP) 作为中药川芎的有效成分之一，属弱的钙拮抗剂，具有钙通道阻滞活性，毒副作用小，价格低廉的特点。在临床上主要用于心血管方面的治疗，魏志霞报道了川芎嗪对肝癌多药耐药株SMMC-27721/ ADM的逆转作用，TMP对人肝癌耐药细胞BEL-7402/ ADM尚无报道[3]。 国内外研究现状分析 近年来，随着抗肿瘤药物作用机理的深入研究，新的抗肿瘤药物不断出现，治疗方法的不断改进，抗肿瘤药物的临床治疗水平亦不断提高。如钙拮抗剂、免疫抑制剂、谷胱甘肽耗竭剂等。由于这些药物的毒副作用较大，至今仍未应用于临床。但目前，临床肿瘤治疗面临的最主要的难题仍是MDR，因此寻找一种高效低毒纠正多药耐药（MDR)的药物及方法应用于临床显得尤为关键。国内在纠正MDR方面，曾做了大量的工作，建立了MDR模型（如KB/VCR，EAC/ADR(Fu)，MCF-7/ADR)。利用这些模型筛选出了一些逆转MDR的药物（如川芎嗪，汉防己甲素，黄连素）。但利用流式细胞术和免疫组化法检测川芎嗪对BEL-7402/ADM中P-gp表达的影响，未检索到国内外相同报道[4]。
