基本信息
- 项目名称：
- 承德汉族人群大肠癌组织中亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T多态性与P170糖蛋白表达的相关性研究
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 本研究探讨MTHFR基因多态性与P170糖蛋白在大肠癌中表达的相关性。采集承德汉族55例大肠癌患者标本，采用PCR-RFLP技术检测大肠癌组织中MTHFR基因C677T的基因型、同时用免疫组化方法检测P170糖蛋白在大肠癌中的表达情况，最后 采用统计学方法，得出结论：大肠癌组织中P170糖蛋白的表达与MTHFR基因677T/T基因型负相关，可能成为大肠癌化疗敏感性的有效指标。
- 详细介绍：
- 目的：研究亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)基因多态性与多药耐药基因蛋白（P170糖蛋白）在大肠癌组织中表达的相关性。 背景： 大肠癌为结肠癌和直肠癌的总称，是我国常见的消化道恶性肿瘤之一，死亡率较高且呈逐年上升趋势。研究证实，P170糖蛋白是造成大肠癌化疗失败的主要原因之一。目前已证明，MDR1基因及其表达产物P170糖蛋白过度表达所介导的对抗癌药物的多药耐药性是影响化疗敏感性的重要因素。流行病学和试验研究提示叶酸缺乏及叶酸代谢异常和结直肠肿瘤发病风险升高有关，亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)是调节叶酸代谢的关键酶,MTHFR C677T基因多态及饮酒影响叶酸代谢,从而影响结直肠肿瘤的发病风险，与大肠癌的关系密切。 方法：收集2009.06--2009.12在承德某医院住院并行手术的55例汉族患者的大肠癌组织标本, 用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)检测大肠癌组织中MTHFR基因C677T的基因型；同时用免疫组化方法检测P170糖蛋白在不同分化程度大肠癌组织中的表达情况。 结果： 55例大肠癌组织中，高分化、中分化、低分化中P170糖蛋白的阳性表达率分别为44.4%(5/9)、52.2%(19/40)、33.3%(4/6)。P170在大肠癌组织中的表达与大肠癌的分化程度无相关性(X2=0.86,P>0.05),其中MTHFR C677T T/T基因型的大肠癌组织中P170糖蛋白阳性表达率显著低于C/T基因型（X2=7.464，P<0.05）；又显著低于C/C基因型（X2=6.875，P<0.05）；C/T基因型和C/C基因型之间大肠癌组织中P170糖蛋白阳性表达率没有显著性差异（X2=0.016，P>0.05）。 结论：MTHFR基因C677T T/T基因型的大肠癌组织中P170糖蛋白的表达明显低于C/T型和C/C型， MTHFR基因C677T T/T基因型可能成为大肠癌化疗敏感性的有效指标，为指导临床医生进行个体化化疗提供理论依据。
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作品专业信息
撰写目的和基本思路
- 目的：研究MTHFR基因多态性与P170糖蛋白在大肠癌中表达的相关性。 思路：P170糖蛋白为多药耐药基因的产物，其表达与大肠癌细胞对化疗药的耐药性呈正相关。P-gp170表达阴性则患者对化疗药物敏感，可进一步预测大肠癌的化疗疗效。P-gp170表达程度的不同可能与MTHFR基因多态性有关。探讨MTHFR三种基因型中哪一种大肠癌细胞P-gp170表达明显降低是本研究要解决的关键问题。
科学性、先进性及独特之处
- 科学性：标本来自承德某医院，均经病理科鉴定。所有实验均在我院基础所组化室和分子生物学室完成。 先进性：MTHFR是影响大肠癌化疗预后的关键酶，近年来相关研究越来越多，但关于MTHFR基因多态性与大肠癌化疗敏感性的研究国内尚未见报道。 独特性：国外相关研究所用材料多为外周血白细胞中提取的DNA，而本实验为癌细胞中提取的DNA，并且本实验把MTHFR基因多态性与P糖蛋白的表达结合起来。
应用价值和现实意义
- 本研究结果显示P170糖蛋白的表达与MTHFR基因多态性有关，MTHFR C677T T/T型患者大肠癌组织P170糖蛋白表达明显低于C/C、C/T型，检测MTHFR C677T基因型可能成为预测化疗效果的重要参考指标，为临床医生进行个体化化疗提供理论依据。
学术论文摘要
- 目的：研究亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性与P170糖蛋白在大肠癌组织中表达的相关性。 方法：收集2009.06--2009.12在承德某医院住院并行手术的55例汉族患者的大肠癌组织标本, 用PCR-RFLP检测大肠癌组织中MTHFR基因C677T的基因型；同时用免疫组化方法检测P170糖蛋白在不同分化程度大肠癌组织中的表达情况。 结果： 55例大肠癌组织中，高分化、中分化、低分化中P170糖蛋白的阳性表达率分别为44.4%(5/9)、52.2%(19/40)、33.3%(4/6)。P170糖蛋白在大肠癌组织中的表达与大肠癌的分化程度无相关性(X2=0.86,P>0.05),其中MTHFR C677T T/T基因型P170糖蛋白阳性表达率显著低于C/T基因型（X2=7.464，P<0.05）；又显著低于C/C基因型（X2=6.875，P<0.05）；C/T基因型和C/C基因型之间无显著性差异（X2=0.016，P>0.05）。 结论：大肠癌组织中P170糖蛋白的表达与MTHFR基因677T/T基因型负相关，可为指导临床医生进行个体化化疗提供理论依据。
获奖情况
- 2011年4月获我院大学生课外学术作品竞赛一等奖
鉴定结果
- 无
参考文献
- 本研究主要技术： 1、用免疫组化方法检测了大肠癌组织的多药耐药基因的表达； 2、用PCR-RFLP检测大肠癌组织亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性； 3、用统计学方法检测多药耐药基因的表达与亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性之间的相关性。 参考文献： 1 Ferrero JM,Etienne MC, Formento JL,et al.Application of anoriginal RT-PCR-ELISA multiplex assay for MDRI and MRP,a long with p53 determination in node-positive breast cancer panems.Br ［J］Cancer,2000,82:171-177 2 徐美东，姚礼庆，顾大镛，等.DCC基因在大肠癌中的表达及其临床意义［J］.中国现代医学杂志.2001，11（9）:23-25. 3 高长明，吴建中，丁建华等 亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T多态性与胃癌易感性的关系［J］.中华流行病学杂志,2002;23:289-292. 4 Yuan SQ, Zhou ZW, Liang YZ, et al. Correlation of chemosensitivity tested using histoculture drug response as say to expression of multidrug resestence genes and proteins in colorectal cancer tissues [J]. Chin J Cancer, 2009,28(9):932-938 5 陈丽、李静等.大肠癌基因多态性的研究进展［J］.辽宁医学院学报2007 10.28(5).
同类课题研究水平概述
- 大肠癌是我国常见的消化道恶性肿瘤，且发病率呈逐年增高趋势。目前大肠癌治疗多采用手术与化疗相结合的综合治疗方法，但化疗效果不尽相同。 近年来多数研究证实，多药耐药现象（MDR）是造成化疗失败和复发的主要原因，多药耐药蛋白（P－gp）成为临床常用的检测恶性肿瘤的指标。P－gp是最早发现的经典的MDR跨膜转运蛋白，是MDR的基因表达产物，因其分子量为170KD，故又称P170，完整的P170糖蛋白既可与抗癌药结合，又可与ATP结合，通过ATP提供能量发生能量依赖变构，通过疏水区形成的通道，主动将抗肿瘤药物泵出细胞外从而降低细胞毒性，并使细胞内化疗药物蓄积下降，导致MDR效应。Yuan[1]等应用组织培养药敏法（HDRA）在一项针对MDR基因及蛋白表达与大肠癌化疗敏感性关系的研究中证明，MDR蛋白的表达在一定程度上和化疗敏感性密切相关，可以作为选择有效个体化化疗方案的因素。因此可以看出，P170糖蛋白的表达程度和大肠癌细胞对化疗药物的耐药性呈正相关；因此P170糖蛋白可以预测大肠癌的化疗疗效。 另外也有研究证实，亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）是影响大肠癌以5－Fu为基础的化疗方案的关键酶，近年来关于基因多态性与大肠癌化疗敏感性的研究越来越多，然而关于MTHFR基因的多态性与大肠癌化疗敏感性的研究国内尚未见报道。Etienne[2]等对98例大肠癌组织中的MTHFR基因型进行分析，MTHFR C677T T/T基因型患者对5－Fu为基础化疗方案的敏感性显著高于C/C、C/T基因型患者；而Afzal S等研究表明，MTHFR C677T多态性很可能不能用于预测手术后大肠癌患者以5－Fu为基础化疗方案的化疗敏感性，但MTHFR C677T C/T基因型表现出的化疗毒副作用低；国内的高长明等的研究表明，MTHFR C677T基因型多态性对于预测以5－Fu为基础化疗方案治疗晚期消化道癌的疗效和毒性具有较好的临床意义；Cohen 等分析了43例晚期大肠癌患者MTHFR基因型多态性与5－Fu为基础化疗方案疗效的关系，发现T/T基因型获得的有效率达100％，而C/C和C/T基因型患者的有效率分别为47％和67％，可能是因为例数较少的缘故，这种差异没有统计学意义。
