基本信息
- 项目名称：
- 双标配体法检测LDL受体活性试剂盒的研发
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 科技发明制作A类
- 简介：
- 现代快节奏的生活中诸多因素，均可导致高胆固醇血症的发生，进而诱发危险的心脑血管病。低密度脂蛋白胆固醇是造成血脂升高的主要原因。有效的检测LDLR活性功能对及早检查和治疗高胆固醇血症对防治心血管疾病具有十分重要的意义。 我们通过开发低价高效、快速稳定、科研临床通用的双标配体试剂盒，进一步完善LDLR活性的检测技术，极大地促进相关领域的研究，提高临床诊断筛选家族性高胆固醇血症的效率。
- 详细介绍：
- 随着人们生活水平的提高，饮食结构的改变，所引起的脂质代谢紊乱（如高脂血症，冠状动脉粥样硬化等疾病）正逐渐威胁着人们的身心健康，这些疾病正越来越受到人们的重视。经研究表明，低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）是造成血脂升高的主要原因，它在体内主要是通过LDLR介导，内吞进入细胞而完成代谢活动的。所以，如何有效的检测LDLR活性功能的手段将可以为及早检查和治疗高胆固醇血症对防治心血管疾病具有十分重要的意义。 目前，国内市场上已有商品化的LDL受体 ELISA检测试剂盒被广泛应用，但是这种方法只能检测细胞LDL受体的含量，而无法反映LDL受体结合、内吞活性的变化及LDL在细胞内的分布情况，而且操作过程繁琐，费时、昂贵。 国外公司研制的DiI-LDL试剂虽然已具有一定的市场，但因其价格昂贵,大大增加了检测成本, 仍未被国内大多数研究机构和医院采用。从而严重制约着我国LDL受体功能活性研究、临床FH诊断筛选以及脂蛋白探针标记技术等的发展。而且我国市场上尚未有商品化的胶体金Au荧光素DiI标记的LDL（Au-DiI-LDL）配体检测LDL受体的试剂盒，且国内市场上的商品化DiI-LDL,仅有北京协生生物科技有限责任本项目的荧光标记的氧化型低密度脂蛋白、上海麦莎生物科技有限本项目DiI标记氧化型低密度脂蛋白，但市场份额较小，进行LDL受体活性检测研究所需要的DiI-LDL大多依赖于国外公司（如BTI公司的DiI标记的人低密度脂蛋白、Kanlen BioMedical公司的DiI-n-LDL等）。而同时利用荧光素DiI和胶体金Au共同标记配体LDL，并将该双标记配体(Au-DiI-LDL)进一步研制成试剂盒，用于检测LDL受体活性的方法在国内外均未见报道。 本项目的双标配体试剂盒能够对细胞LDL受体活性做定性定量检测，灵敏度高，特异性强，操作简便，对人体无毒害，并且能够反映单细胞LDL受体的活性变化及LDL被细胞摄入后在细胞内的分布情况，所蕴含的市场前景巨大。 同批细胞即可应用荧光显微镜、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜等多种检测技术对细胞LDL受体结合、内吞的活性进行定性定量分析，也可以利用透射电镜直观检测单细胞内LDL受体的内吞活性及LDL在细胞内的分布情况，即可应用于科学研究中对LDL受体的活性检测，也可应用于临床高效诊断筛选FH，具有较高的应用价值。 技术关键和主要技术指标： 本项目根据低密度脂蛋白（LDL）受体能够特异性结合LDL，并内吞进入胞内代谢这一机制，旨在利用成熟的LDL提取纯化技术、荧光素(DiI)标记和胶体金(Au)标记技术。通过灵敏性、稳定性、重复性、样本适用性等指标进行质量检测。
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作品专业信息
设计、发明的目的和基本思路、创新点、技术关键和主要技术指标
- 随着人们生活水平的提高，饮食结构的改变，所引起的脂质代谢紊乱正逐渐威胁着人们的身心健康，这些疾病正越来越受到人们的重视。经研究表明，低密度脂蛋白胆固醇是造成血脂升高的主要原因。所以，如何有效的检测LDLR活性功能的手段将可以为及早检查和治疗高胆固醇血症对防治心血管疾病具有十分重要的意义。 本项目的双标配体试剂盒能够对细胞LDL受体活性做定性定量检测，灵敏度高，特异性强，操作简便，对人体无毒害，并且能够反映单细胞LDL受体的活性变化及LDL被细胞摄入后在细胞内的分布情况，所蕴含的市场前景巨大。 同批细胞即可应用荧光显微镜、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜等多种检测技术对细胞LDL受体结合、内吞的活性进行定性定量分析，也可以利用透射电镜直观检测单细胞内LDL受体的内吞活性及LDL在细胞内的分布情况，即可应用于科学研究中对LDL受体的活性检测，也可应用于临床高效诊断筛选FH，具有较高的应用价值。 本项目根据低密度脂蛋白（LDL）受体能够特异性结合LDL，并内吞进入胞内代谢这一机制，旨在利用成熟的LDL提取纯化技术、荧光素(DiI)标记和胶体金(Au)标记技术。通过灵敏性、稳定性、重复性、样本适用性等指标进行质量检测。
科学性、先进性
- 本项目根据低密度脂蛋白受体能够特异性结合LDL，并内吞进入胞内代谢这一机制，旨在利用成熟的LDL提取纯化技术、荧光素标记和胶体金标记技术，研制开发低价高效、快速稳定、科研临床通用的双标配体法检测LDL受体活性的试剂盒，同批细胞即可应用荧光显微镜、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜等多种检测技术对细胞LDL受体结合、内吞的活性进行定性定量分析，也可以利用透射电镜直观检测单细胞内LDL受体的内吞活性及LDL在细胞内的分布情况，即可应用于科学研究中对LDL受体的活性检测，也可应用于临床高效诊断筛选FH，具有较高的应用价值。 本试剂盒标记配体的获得率高，样品适用范围广，通过质量检测与控制保证该试剂盒的特异性达99%，在10～25ug/ml工作范围内敏感性≥95%，重复性好、稳定性高、两种信号的交叉性小、完全能满足LDL受体活性检测试剂盒的要求。
获奖情况及鉴定结果
- 1、论文：《Construction of Colloid Gold-Fluorescein Double-Labelled Method to Detect LDL Receptor Function》一篇，已投稿Methods（IF：3.763）。 2、《双标配体法检测LDL受体活性试剂盒的研发》获得2009年的浙江省大学生科技创新活动计划（新苗人才计划）的资助。（编号：1160100631）
作品所处阶段
- 中试阶段
技术转让方式
- 面议
作品可展示的形式
- 实物、产品
使用说明,技术特点和优势,适应范围,推广前景的技术性说明,市场分析,经济效益预测
- 本项目试剂盒的部分推广范围包括国内各大医院（临床上明确高血脂的病因并确定相应的治疗方法，从人群中普查体检筛选FH患者等诊断需要）、科研单位（相关科学研究中对LDL-R检测）等LDL-R检测试剂盒的用户，市场前景非常广阔。该产品试剂盒与进口试剂相比，在不影响检测效果的情况下，由于技术含量高，生产成本低，有很强的市场竞争力，市场潜在价值非常可观。 根据双标配体法检测LDL受体试剂盒的产品特点项目推广将选择无差异市场营销。无差异市场营销指公司只推出一种产品,或只用一套市场营销办法来进行市场推广，采取大量市场营销策略. 大量生产双标配体法检测LDL受体试剂盒产品，并通过众多的渠道大量推销该产品，用这个产品来获取市场，取得有利竞争力，提高经济效益。
同类课题研究水平概述
- 细胞表面LDL-R的分析方法主要包括受体含量检测和受体活性检测两个方面：利用LDL-R抗体和酶联免疫的方法可以直接测定LDL-R的含量，但是这种方法只能检测细胞LDL-R的含量，而无法反映LDL-R结合、内吞活性的变化及LDL在细胞内的分布情况（如目前已有商品化的LDL受体 ELISA检测试剂盒被广泛应用。但是这种方法只能检测细胞LDL受体的含量，而无法反映LDL受体结合、内吞活性的变化及LDL在细胞内的分布情况）。 而为了体外研究LDL的细胞代谢和LDL-R活性，起先使用同位素，采样困难和操作过程繁琐，且费时、昂贵，故在研究和临床诊断中难以广泛开展。后用胶体金记配体LDL制备Au-LDL探针，与细胞直接孵育，利用透射电镜观察细胞内LDL-R的内吞功能及LDL在细胞内的分布情况。 近年来，随着荧光显微镜技术的发展和专一的荧光分子探针的问世，以DiI、FITC等荧光试剂标记的LDL已代替125I-LDL成为检测LDL-R结合、内吞活性的主要技术手段，并得到广泛应用。这种方法能够对细胞LDL-R功能做定性定量检测，灵敏度高，特异性强，操作简便，对人体无毒害，并且能够反映单细胞LDL-R的活性变化及LDL被细胞摄入后在细胞内的分布情况。 随着人们生活水平的提高，饮食结构的改变，所引起的脂质代谢紊乱（如高脂血症，冠状动脉粥样硬化等疾病），相关的疾病正越来越受到人们的重视，同时相关的研究也在逐渐的深入。 目前，我国市场上尚未有商品化的胶体金Au荧光素DiI标记的LDL配体检测LDL受体的试剂盒，且国内市场上的商品化DiI-LDL,仅有北京协生生物科技有限责任本项目的荧光标记的氧化型低密度脂蛋白、上海麦莎生物科技有限本项目DiI标记氧化型低密度脂蛋白，但市场份额较小，进行LDL受体活性检测研究所需要的DiI-LDL大多依赖于国外本项目。虽然国外本项目研制的DiI-LDL试剂已具有一定的市场，但因其价格昂贵,大大增加了检测成本, 仍未被国内大多数研究机构和医院采用，从而严重制约着我国LDL受体功能活性研究、临床FH诊断筛选以及脂蛋白探针标记技术等的发展。而同时利用荧光素DiI和胶体金Au共同标记配体LDL，并将该双标记配体(Au-DiI-LDL)进一步研制成试剂盒，用于检测LDL受体活性的方法在国内外均未见报道。
