基本信息
- 项目名称：
- 《基于痰脱落细胞学制备技术在肺癌诊断中的研究》
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 肺癌是最常见恶性肿瘤之一，发病率以及死亡率均位于首位，近年发病率呈增长趋势。为此肺癌的早期发现，早期诊断尤为重要。痰找脱落细胞检查是目前临床诊断肺癌的常用方法，但敏感度较低。LCT是近年来一项新技术，可以使细胞快速固定并去除杂质干扰，能提高细胞检出率及试验可重复性。高渗盐水雾化吸入通过其高渗刺激作用使支气管深部痰液易于引出。因此，我们进行将高渗盐水雾化、LCT及ICC技术结合运用于肺癌诊断的研究。
- 详细介绍：
- 肺癌是世界各地最常见的恶性肿瘤之一，也是我国最常见的恶性肿瘤，长期存活率低，预后较差，发病率以及死亡率均位于所有恶性肿瘤首位，近年发病率呈增长趋势。为此肺癌的早期发现，早期诊断尤为重要。痰找脱落细胞检查是目前临床诊断肺癌的常用方法，其具有无创、简便和易被患者接受的特点 ,其特异度高 ,但敏感度较低 ,假阴性率约为 20 %～60 % ,并有一定的假阳性(约 2 %)。 LCT是近年来引进的一项新技术，其使用专门的细胞固定液及特殊的处理程序，可以使细胞快速固定并去除其中的血液、黏液、炎症细胞等的干扰，从而提高细胞检出率及试验的可重复性。 高渗盐水雾化吸入对支气管和肺泡内壁有一定的润滑作用，同时其高渗刺激作用也可使支气管深部痰液易于引出。因此，诱导排痰作为一种无创性检查手段逐渐受到临床医师的认可。 本研究首先探讨液基薄层细胞学（LCT）和细胞免疫化学（ICC）技术在肺癌患者痰液检测中的应用价值。其次在体外建立粘膜受损模型，研究不同浓度氯化钠在不同时间内对粘膜细胞的形态学影响，探索细胞受电解质浓度影响的耐受程度，找出较适宜的浓度范围及作用时间，使临床雾化吸入的高渗盐水的浓度及作用时间更加适宜，减少脱落细胞的损伤，以提高肺癌诊断率。最后在原有的高渗盐水雾化技术及LCT上，改进制备细胞病理标本工艺使得细胞膜不被破坏，保证了细胞的完整性，便于细胞的免疫组化，提高肺癌诊断率及病理分型。 研究一：应用LCT检测 3 466例痰标本，共检出135例肺癌，其中有10例不能明确癌细胞类型的标本，应用ICC技术，分别进行34βE12、Ckpan等抗体标记，结果显示：经ICC标记后明确诊断鳞癌3例、腺癌2例、小细胞癌4例，并得到纤支镜活检证实。用ICC标记后诊断明确率达90%，明显优于单纯LCT。结论：在痰液脱落细胞检查中，LCT结合ICC能使肺癌细胞类型诊断明确率显著提高。 研究二：通过爬片培养粘膜上皮细胞30份，分5组，分别以5个梯度浓度（0.9%、1.8%、2.7%、3.6%、4.5%）NaCl溶液作用，并各取6个时间点（10min、20min、30min、40min、50min、60min）的玻片进行HE染色固定；应用病理显微图像分析系统采集图片测定细胞及胞核的等效直径，统计细胞总数、裸核细胞数；计算核浆比和裸核出现率。结果显示：粘膜上皮细胞核浆比例和裸核细胞出现率与高渗盐水的浓度和作用时间呈正相关。且高渗盐水浓度达到2.7%、作用时间达到20min时，粘膜上皮细胞的核浆比例和裸核细胞出现率均开始出现显著升高。结论：粘膜上皮细胞对高渗盐水浓度低于2.7%且作用时间在20min内具有耐受现象，超过此范围可对细胞产生较严重的损伤。为高渗盐水雾化吸入提供了适宜的浓度及时间。 研究三：40例疑诊为支气管肺癌患者经雾化吸入40ml的2.7%的高渗盐水20min，所得到痰标本进行LCT处理，进行常规诊断， 35例LCT残液同时进行ICC标记。结果显示： 40例可疑患者中，常规诊断肺癌共35例，阳性检出率87.50%，灵敏度100%，特异性100%，两种方法肺癌检出率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。35例经ICC标记结果显示细胞类型与常规诊断一致。结论：运用2.7%高渗盐水雾化20min后结合LCT技术与ICC技术检查的研究值得重视和推广，可为早期肺癌及其他呼吸系统疾病的研究、监测和普查奠定了基础。 LCT技术的应用在很大程度上解决了常规痰涂片中存在的粘液、炎细胞及其它杂质等的干扰问题，如结合ICC技术，不但能提高痰脱落细胞的阳性检出率，并且能明确肿瘤细胞的类型，为临床治疗提供帮助。 本组研究表明，应用2.7%浓度的高渗盐水雾化诱导20分钟，可解决痰量少等问题，并且能保证细胞的完整性，为明确肿瘤诊断提供了保证。我们发现在取痰的过程中，有些患者尽管超声雾化吸入，但还是不能将痰液咳出。临床上，患有呼吸系统疾病的病人也会出现咳痰困难的现象，如慢性阻塞性肺疾病、呼吸衰竭病人。痰液的潴留对机体带来危害，并促进呼吸道内的微生物繁殖滋生，导致炎症恶化与扩散，引发继发感染。因此，我们设计一款操作简单、实用、经济的辅助排痰装置。患者可以用该装置自行刺激排痰，从而节省护士在协助排痰上所浪费的时间。由于此款装置操作简单，在家疗养的患者也可使用此装置。
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作品专业信息
撰写目的和基本思路
- 目的：改进痰脱落细胞学制备技术，提高肺癌诊断率。 基本思路：首先，探讨液基薄层细胞学（LCT）技术及免疫化学标记（ICC）技术在肺癌及其类型诊断中价值。其次，研究不同浓度氯化钠和时间对粘膜细胞形态学影响，说明高渗盐水诱导痰在临床应用中出现裸核及细胞膜破裂原因。再次，在原有高渗盐水雾化技术及LCT上，改进制备细胞病理标本工艺，保证细胞完整性。最后，设计一款简单、实用辅助排痰装置，协助患者排痰。
科学性、先进性及独特之处
- 1、高渗盐水雾化诱导取痰能增加痰量和卷带脱落细胞量，根据体外建模得到的耐受浓度和时间提取细胞能有效提高肺癌阳性诊断率，且较纤支镜安全。 2、液基细胞诊断试剂能保存细胞完整性、抗原生物特性并能去除痰中杂质，延长痰液送检时间，最大限度收集有效细胞，利于病理医师观察诊断。 3、按压胸骨切迹上气管前壁引起咳嗽从而促进痰排出是一种生理反射，对机体无损害。设计的装置使临床取痰标本更简便、安全、有效。
应用价值和现实意义
- 1、体外得到的耐受浓度可作为今后粘膜细胞提取的参考，助于完整细胞提取。 2、将高渗盐水雾化诱导痰、LCT与ICC结合运用于肺癌早期诊断及分型的技术可操作性好、无创，能避免一系列并发症且成本较低，可广泛运用于肺癌筛查及诊断，为肺癌治疗提供依据，改善肺癌患者生活质量并提高生存率，进而增加社会和经济效益。 3、制作的装置方便患者自行取痰，减少人力浪费；也可在家使用，减少医院人流及医源性感染机会。
学术论文摘要
- 为提高早期肺癌患者支气管黏膜脱落细胞的阳性检出率。首先应用LCT技术对3466例可疑肺癌痰标本检查诊断，判断阳性率，不能明确癌细胞类型的，结合ICC对其LCT残液分别进行抗体标记，从而确定细胞类型，探讨LCT和ICC技术在肺癌诊断中的应用价值。其次爬片培养粘膜上皮细胞30份，分5组以5个梯度浓度（0.9%、1.8%、2.7%、3.6%、4.5%）NaCl溶液作用，并各取6个时间点玻片进行HE染色固定，应用病理显微图像分析系统采集图片测定细胞及胞核的等效直径，统计细胞总数、裸核细胞数，计算核浆比和裸核出现率，为高渗盐水雾化吸入提供适宜的数据。最后对40例疑诊为支气管肺癌的患者雾化吸入适宜浓度高渗盐水获取痰液，并对其痰标本进行LCT处理，并应用ICC标记，以明确肺癌诊断及细胞分型。 经上述研究发现：1.痰液脱落细胞检查中，LCT结合ICC使肺癌细胞类型诊断明确率显著提高。2. 粘膜上皮细胞对高渗盐水浓度低于2.7%且作用时间在20min内具有耐受现象，超过此范围对细胞可产生较严重的损伤。3. 运用2.7%高渗盐水雾化20min后结合LCT技术与ICC技术检查的研究值得重视和推广。
获奖情况
- 1、《LCT与ICC在肺癌患者痰液检测中的应用及评价》发表于二级核心期刊《山东医药》2009 年49卷52期 。 2、《粘膜上皮细胞对高渗盐水的耐受性研究》发表于《嘉兴学院学报》2010年22卷6期。
鉴定结果
- 同意推荐。
参考文献
- LCT技术: [1]陈世梁.膜式超薄液基细胞学检测技术在肺癌诊断中的应用[J].实用癌症杂志,2007,3(2):196-197. [2]Laverty CR, Farnsworth A, Thurloe J K, et al. Evaluation of the Cyto Rich slide preparation process [J]. Anal Quant Cytol Histol, 1997,19(3):239-245. [3]李建华,付志民,吴广平,等.液基细胞学检测对非妇科细胞标本肿瘤细胞诊断的意义[J].中国医科大学学报,2004,10(5):414-420. [4]吴广平,王恩华,李建华,等.液基细胞学检查系统在肺癌患者痰液检查中的临床应用价值[J].中国肺癌杂志,2006,9(2):192-195. 高渗盐水超声雾化技术: [1]杨晓芸，胡雪莲，景莉玲.高渗盐水雾化吸入诱导痰在肺癌细胞学诊断中的应用[J].宁夏医学杂志,2008,30（4）:336. [2]罗晓东，娄德剑等.高渗盐水雾化吸入诱导痰对老年人肺癌细胞学的诊断作用[J] .中华老年医学杂志,2005,2(24):117-118.
同类课题研究水平概述
- 纤维支气管镜肺泡灌洗术是目前临床肺癌确诊常用手段，其是以纤支镜嵌入到肺段或亚段支气管水平，反复以无菌生理盐水灌洗、回收的一项技术，并对其回收液（BALF）进行细胞学、生化学、酶学和免疫学等一系列检测和分析。 该技术与雾化吸入高渗盐水诱导痰比较： 共同目的：支气管末端粘膜脱落细胞制备与诊断 不同之处：纤维支气管镜肺泡灌洗术是使用纤维支气管镜进行操作，对近期心肌梗死、严重心律失常患者是禁用的；在患有高血压病、冠心病、大咯血急性期、危重病人或体质极度衰弱者的情况下需要慎用；在操作过程中可能出现恶心、咳嗽、紫绀、出汗、烦躁、呼吸困难、肺部哮鸣音、呼吸和（或）心跳停止等情况；术后会出现鼻腔咽喉不适、疼痛、鼻衄、声嘶、头晕、胸闷等状况。而雾化吸入高渗盐水诱导痰是使用雾化机，适用于任何患者，甚至对于重症稳定性哮喘、慢性阻塞性肺病患者、对纤维支镜检有相对禁忌证或有危险或拒绝纤维支气管镜检的老年人；无任何禁忌症、慎用情况、操作过程中可能出现的不良情况以及术后不良反应。从上述比较中，可以发现雾化吸入高渗盐水诱导痰技术不论从适用对象、操作方式还是操作后对机体的影响上均占优势。
