基本信息
- 项目名称：
- 禽流感（H5N1）油乳剂灭活疫苗抗原效价快速检测方法的建立
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 建立了以三氯甲烷为破乳剂，8 000 r/min 离心5分钟的快速脱乳分离疫苗抗原，应用HA试验检测疫苗抗原的HA效价的禽流感（H5N1）油乳剂灭活疫苗抗原效价快速检测方法。同时明确了破乳后抗原液与制成油乳疫苗前相应水相的HA价下降1～3个滴度，用该法检测的疫苗效价的高低顺序与免疫小鸭的每周抗体水平高低顺序成正相关关系。
- 详细介绍：
- 试验通过对低温冻融法、研磨法、稀释高速捣碎法、95%乙醇法及三氯甲烷法破乳效果比较, 筛选出三氯甲烷为油乳剂疫苗的有效破乳剂。将不同抗原含量的H5亚型灭活疫苗破乳后离心取上清液，测定其HA价，结果发现脱乳后上清液与制成油乳疫苗前相应水相的HA价下降1～3个滴度, 且不同稀释度抗原制备H5亚型疫苗经脱乳处理后其上清液的HA价与荧光定量PCR 结果基本成正比，建立了禽流感油乳剂疫苗抗原HA价的检测方法，该法具有快速、经济、简便, 尤其适合于对大批量及基层应用。采用该法对来源于国家指定厂家生产的不同批次20瓶AI H5N1油乳剂灭活疫苗进行检测，并用检测的0log，2log2，3log2，4log2d 4个不同效价的疫苗对雏鸭进行平行免疫试验，比较免疫抗体水平，结果不同来源疫苗的上清HA效价差异较大，最高为4log2，最低为0。HA价分别为0、2log2、3log2和4log2的AI油苗均可诱导小鸭产生一定水平HI抗体，其抗体峰值分别为3.73log2、4.82log2、6.54log2、6.7log2，所诱导的AIH5HI抗体水平具有明显的差异，其抗体水平高低与免疫用疫苗效价高低情况成正相关关系。同时证明了该检测方法的科学性。
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作品专业信息
撰写目的和基本思路
- 建立了以三氯甲烷为破乳剂，8 000 r/min 离心5分钟的快速脱乳分离疫苗抗原，应用HA试验检测疫苗抗原的HA效价的禽流感（H5N1）油乳剂灭活疫苗抗原效价快速检测方法。同时明确了破乳后抗原液与制成油乳疫苗前相应水相的HA价下降1～3个滴度，用该法检测的疫苗效价的高低顺序与免疫小鸭的每周抗体水平高低顺序成正相关关系。
科学性、先进性及独特之处
- 1、建立了禽流感油乳剂灭活疫苗HA效价的快速检测方法，解决了目前禽流感油乳剂灭活疫苗成品使用者在使用前进行疫苗效价检测难题。 2、基本明确所检测疫苗的HA效价与用于制备该疫苗的水相抗原效价的数量关系。 3、明确了所检测疫苗的HA效价与免疫鸭HI抗体水平的关系，提高了本检测方法对疫苗检测结果评价的科学性。
应用价值和现实意义
- 1、禽流感油乳剂灭活疫苗HA效价的快速检测方法可以直接应用于疫苗采购方在采购疫苗对不同来源疫苗进行基本的抗原效价检测，从而对疫苗来源做到更好的筛选； 2、家禽生产者在使用疫苗前对疫苗使用前确定其抗原效价，避免使用低效价疫苗，引起免疫失败，达不到预期防控效果。 3、本检测方法操作简便，所需仪器设备较为简单，无需特别试剂，适合于畜牧兽医基层及广大生产场使用，具有较强的推广性。
学术论文摘要
- 试验通过对低温冻融法、研磨法、稀释高速捣碎法、95%乙醇法及三氯甲烷法破乳效果比较, 筛选出三氯甲烷为油乳剂疫苗的有效破乳剂。将不同抗原含量的H5亚型灭活疫苗破乳后离心取上清液，测定其HA价，结果发现脱乳后上清液与制成油乳疫苗前相应水相的HA价下降1～3个滴度, 且不同稀释度抗原制备H5亚型疫苗经脱乳处理后其上清液的HA价与荧光定量PCR 结果基本成正比，建立了禽流感油乳剂疫苗抗原HA价的检测方法，该法具有快速、经济、简便, 尤其适合于对大批量及基层应用。采用该法对来源于国家指定厂家生产的不同批次20瓶AI H5N1油乳剂灭活疫苗进行检测，并用检测的疫苗对雏鸭进行平行免疫试验，比较免疫抗体水平，其抗体水平高低与免疫用疫苗效价高低情况成正相关关系。同时证明了该检测方法的科学性。
获奖情况
- 2010年在佛山科学技术学院举办的第九届“挑战杯”获得二等奖; 2011年在广东省举办的第十一届“挑战杯”广东大学生课外学术科技作品竞赛终审决赛获得三等奖
鉴定结果
- 已完成论文
参考文献
- 现有技术： 1、对抗原（水相）制备油乳剂疫苗前的效价测定技术； 2、对油乳剂灭活疫苗接种动物后的免疫抗体检测技术； 3、免疫动物的免疫保护试验（攻毒）。 相关技术文献检索目录： [1]农业部. 中华人民共和国兽用生物制品规程[M]．化学工业出版社，2000 [2]中华人民共和国农业部.高致病性禽流感疫情处置技术规范( 试行)[S],2004 [3]姜北宇.禽用新疫苗的研发与申报[J].中国家禽,2010,31(24):5-8 [4]王蕾. 禽用生物制品的质量检测[J].畜禽业，2007,9：38-39 [5]丁宜宝.兽用疫苗学[M].中国农业出版社，2008,11:217-220,336-344
同类课题研究水平概述
- 禽流感自1878年暴发于意大利，100余年来，该疾病逐步传遍世界各主要养禽的国家和地区。目前禽流感在世界范围内的流行，给养禽业以严重打击的同时，对公共卫生事业也构成重大威胁。防控禽流感已成为国际社会共同的责任，目前世界各国均高度重视防控禽流感，投入大量的人力物力进行相关研究。国内外众多专家学者对禽流感的流行趋向、病原演变动态、致病机理、诊断技术、免疫机理等进行了大量研究，近年来我国对禽流感相关疫苗研制、免疫程序、免疫效果等方面更是进行深入的研究，并取得了可喜的成绩，在有效防控禽流感上起到了关键作用。但是由于禽流感病毒易于变异，加上水禽（尤其是白鸭）对禽流感疫苗的免疫反应低下等因素，禽群防控禽流感的压力越来越大，禽群仍然受到禽流感的严重威胁，应当注意到水禽禽流感免疫失败的情况仍然时有发生，事实上对大量水禽禽流感免疫监测的结果显示，众多的免疫群抗体合格率较低，远未达到合格的标准。但究其原因，除了免疫程序的科学性和家禽自身的免疫机能外，所用疫苗的质量是免疫成功的前提，尤其是疫苗抗原效价的高低与免疫效果具有直接关系。对于禽流感疫苗抗原效价检测，目前主要由生产厂家按照国家相关要求与规程进行检测把控，制备成品出厂后直至接种家禽基本不再进行检测，用户只有通过采用动物免疫接种后的抗体检测来衡量免疫效果。虽然目前对禽流感疫苗免疫抗体的检测方法、免疫抗体的消长规律以及免疫效力等方面均进行了深入的研究，并形成了较为成熟的技术体系。但免疫效果检测费时费力，不利于大量样品的检测，且步骤繁琐，只能进行少数的抽检，而更多的中小养户没有相关的检测能力，只能是按常规注射疫苗。实际上，疫苗出厂后还要经过运输、贮存等诸多环节，这些环节如出现不当均可疫苗的效价造成影响，所以禽流感疫苗在使用前如能进行效价的检测，可以有效避免低效价疫苗进入流通与使用，导致引起免疫失败而达不到预期防控效果。但目前有关适合基层使用的禽流感疫苗成品抗原效价的快速检测方法尚为欠缺，本实验建立了“氯仿脱乳－HA快速检测AI油乳剂灭活苗效价”检测方法，该法具有快速、经济、简便, 尤其适合于对大批量及基层应用，基本解决禽流感油乳剂疫苗成品的抗原检测问题。
