基本信息
- 项目名称：
- 汉坦病毒双启动子双价核酸疫苗载体的构建
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 肾综合征出血热是一种由汉坦病毒引起的严重危害人体健康的自然疫源性疾病。它是我国重点防治的传染病之一。核酸疫苗是近年发展的新型疫苗。它可诱导保护性体液免疫和以特异性CTL为标志的细胞免疫，具有效价高、安全、稳定和生产简便等特点。但一般单抗原表达的核酸疫苗免疫效果并不尽人意。本研究拟构建两种汉坦病毒血清型的单质粒双真核启动增强子表达载体，将为后续研制高表达的双价核酸疫苗奠定基础。
- 详细介绍：
- 肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS)是一种由汉坦病毒引起的严重危害人体健康的自然疫源性疾病。它是我国重点防治的传染病之一，其发病率占全世界的90％以上。在我国人群中流行的汉坦病毒主要有汉滩病毒(HTNV)和汉城病毒(SEOV)两种亚型，病死率分别约为10%和1%，而且在同一地区存在此两种亚型的交叉混合流行。由于其发病机制复杂、临床表现多样、病情危重易变、并发症多且没有特效的治疗药物，所以病死率居高不下，直接危害人民的生命健康和经济建设。核酸疫苗是近年发展的新型疫苗。它是将编码某一特定蛋白抗原的基因片段与真核表达载体相连，而后直接注入人体，即可诱导保护性体液免疫和以特异性CTL为标志的细胞免疫，具有效价高、安全、稳定和生产简便等特点。但一般单抗原表达的核酸疫苗免疫效果并不尽人意，因此如何提高其免疫原性以刺激机体产生高效的免疫效应成为学者们关注的焦点。我们前期已构建汉滩病毒S基因和B7-1分子基因头尾相接的顺式双启动子共表达载体，使多个外源基因在同一细胞中同时表达，显著增强了其免疫效果。为此，本研究拟构建两种汉坦病毒血清型的单质粒双真核启动增强子表达载体，并观察其在真核细胞中的表达情况，将为后续研制高表达的双价核酸疫苗奠定基础。
作品专业信息
撰写目的和基本思路
- 在构建汉滩病毒（HTNV）和汉城病毒（SEOV）的双价M2基因单质粒双真核启动增强子表达载体，并观察其在真核细胞中的表达情况。 1)从汉滩病毒76-118株和汉城病毒BjHD01株分离M基因片段。应用PCR方法从中扩增出各自的M2基因片段。2）构建携带双真核启动增强子、表达HTNV和SEOV的M2基因片段的真核表达载体。3）检测上述载体在体外哺乳动物细胞中的表达。
科学性、先进性及独特之处
- 1、目前本项目已扩增出并分析出所需汉滩病毒和汉城病毒的M2基因片段，并具备构建单质粒双增强子-启动子双M2基因表达载体的技术和经验基础。 2、本项目将构建单质粒双增强子-启动子双M2基因表达载体，是目前一种对汉坦病毒有良好免疫效果的双价核酸疫苗。 3、对单质粒双增强子-启动子双M2基因表达载体进行顺、反式构建，并进行此两种载体表达效果的比较。
应用价值和现实意义
- HFRS是由汉坦病毒引起的一组急性自然疫源性疾病，我国是世界上受其危害最严重的国家。至今为止没有特效药物，疫苗是预防本病的关键。核酸疫苗是近年发展的新型疫苗，它具有效价高、安全、稳定和生产简便等特点。但一般单抗原表达的核酸疫苗免疫效果不佳。通过上述载体的构建可以完善双价核酸疫苗，从而达到对此两种病毒更好的免疫效果，能为进一步控制我国HFRS奠定基础。
学术论文摘要
- 肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS)是一种由汉坦病毒引起的严重危害人体健康的自然疫源性疾病。它是我国重点防治的传染病之一，其发病率占全世界的90％以上。在我国人群中流行的汉坦病毒主要有汉滩病毒(HTNV)和汉城病毒(SEOV)两种亚型，病死率分别约为10%和1%，而且在同一地区存在此两种亚型的交叉混合流行。由于其发病机制复杂、临床表现多样、病情危重易变、并发症多且没有特效的治疗药物，所以病死率居高不下，直接危害人民的生命健康和经济建设。核酸疫苗是近年发展的新型疫苗。它是将编码某一特定蛋白抗原的基因片段与真核表达载体相连，而后直接注入人体，即可诱导保护性体液免疫和以特异性CTL为标志的细胞免疫，具有效价高、安全、稳定和生产简便等特点。但一般单抗原表达的核酸疫苗免疫效果并不尽人意，因此如何提高其免疫原性以刺激机体产生高效的免疫效应成为学者们关注的焦点。本研究拟构建两种汉坦病毒血清型的单质粒双真核启动增强子表达载体，并观察其在真核细胞中的表达情况，将为后续研制高表达的双价核酸疫苗奠定基础。
获奖情况
- 2010年8月发表于《中国医科大学学报》第39卷第8期 文章编号：0258-4646（2010）08-0673-0
鉴定结果
- pETBlue2—重组片段载体经酶切后琼脂糖凝胶电泳;重组表达片段-HTNV-M2载体经酶切后琼脂糖凝胶电泳;pcDNA 3.1+SEOV-M2-重组表达片段-HTNV-M2载体经酶切后琼脂糖凝胶电泳
参考文献
- 细胞生物信息技术：《细胞生物技术实验指南》《细胞分子生物学技术教程》等 基因工程技术：《基因工程原理和技术》等 免疫荧光技术：《荧光和免疫荧光染色技术及应用》等
同类课题研究水平概述
- 肾病综合症是我国重点防治疾病之一，而汉坦病毒是引起的肾病综合症的主要病毒。对于汉坦病毒疫苗的研制主要为了在传统的诊治方法以及疫苗的研究上改善发病情况，预防肾病综合症的发生。汉坦病毒疫苗分为灭活疫苗、减毒疫苗、基因工程疫苗和核酸疫苗。灭活疫苗分为单价疫苗和双价疫苗,双价疫苗用于同时存在HTN 和SEO 流行的地区。减毒活疫苗是通过不同的方法，使病毒的毒力即致病性减弱或丧失，疫苗由完整的病毒组成。它是目前效果最好的疫苗，具有免疫原性好等优点。但是近年来，对于汉坦病毒疫苗的研究近年来倾向于核酸疫苗的研制。 核酸疫苗的发展开始于20世90 年代，它是利用现代生物技术免疫学、生物化学、分子生物学等研制成的，具有安全稳定、特异性强、提供交叉防御、有利于多价多联疫苗的研制的优点。核酸疫苗分为DNA 疫苗和RNA疫苗两种，而目前对核酸苗的研究以DNA 疫苗为主。近年来，关于核酸免疫的研究在世界范围内广泛展开，所涉及的范围包括人和动物的各种细菌性、病毒性及寄生虫病，如流感病毒血凝素基因、乙肝病毒包膜抗原基因、狂犬病毒G 蛋白基因、牛疱疹病毒2型糖蛋白基因、肺炎支原体和利什曼原虫gp63等。但是大多主要停留在疫苗的构建、增强疫苗免疫效果以及动物实验诱导的层面，在临床中尚属于试验阶段。 核酸疫苗是近年来发展起来的一项新的生物技术，已成为疫苗研究领域的热点之一，并获得了迅速的发展。研究表明，DNA 疫苗既可作为病毒、细菌或寄生虫的预防疫苗，也可作为非感染性疾病如肿瘤病的治疗用疫苗。另外，它为变态反应性疾病和自身免疫病的治疗也提供了新的希望。因此核酸疫苗有可能发展成为其它物质无可替代的产品，为将来人类和动物的健康保驾护航。
