主办单位: 共青团中央   中国科协   教育部   中国社会科学院   全国学联  

承办单位: 贵州大学     

基本信息

项目名称:
转抗菌蛋白基因LTP小麦的筛选与检测
小类:
生命科学
简介:
该项目是以检测导入抗菌蛋白基因的小麦植株为主,为进一步培育具抗菌蛋白的小麦品种提供了可能,也为该技术的进一步应用奠定强有力的基础。同时筛选了小麦品种西农1376愈伤组织分化筛选的最适PPT浓度,为以后小麦组培技术及小麦愈伤组织的筛选提供参考资料。
详细介绍:
该项目是以检测导入抗菌蛋白基因的小麦植株为主,为进一步培育具抗菌蛋白的小麦品种提供了可能,也为该技术的进一步应用奠定强有力的基础。本项目通过对打过基因枪的小麦幼胚愈伤组织的诱导、筛选、分化与植株再生,对获得的转基因小麦植株进行PCR分析和抗除草剂反应鉴定,进一步筛选导入抗菌蛋白基因的小麦植株。同时本实验筛选了小麦品种西农1376愈伤组织分化筛选的最适PPT浓度,为以后小麦组培技术及小麦愈伤组织的筛选提供参考资料。本项目为以后实验室转基因研究奠定了基础,优化了小麦品种西农1376愈伤组织筛选的最佳PPT浓度,进一步肯定了基因枪法在转基因技术中的地位,并在实验室条件下获得了具有目的基因的转基因小麦植株,以期获得对小麦条锈病具有抗性的小麦新品种。一旦选育出抗性品种,将为以后培育新品种提供良好的育种材料。

作品图片

  • 转抗菌蛋白基因LTP小麦的筛选与检测
  • 转抗菌蛋白基因LTP小麦的筛选与检测
  • 转抗菌蛋白基因LTP小麦的筛选与检测
  • 转抗菌蛋白基因LTP小麦的筛选与检测

作品专业信息

撰写目的和基本思路

目的:本实验以检测导入抗菌蛋白基因的小麦植株为主,为获得具有抗菌蛋白的小麦植株提供技术支持。同时,优化小麦愈伤组织分化筛选的最适PPT浓度,对小麦品种西农1376组织培养及小麦愈伤组织的筛选提供参考资料。 基本思路:基因枪轰击小麦幼胚愈伤组织,对轰击后的愈伤组织进行诱导、筛选、分化及植株再生,将获得的转基因小麦植株进行PCR检测和抗除草剂反应筛选,初步得到导入抗菌蛋白基因的小麦植株。

科学性、先进性及独特之处

本实验勇于创新与突破,其先进独特之处在于:①首次利用基因枪转化法将来自中草药益母草种子的抗菌蛋白基因LTP 导入小麦品种西农1376;②通过对愈伤组织分化筛选的PPT浓度的选择,采用了最适的PPT浓度(2 mg/L)对其进行筛选,以获得再生小麦植株;③ 针对目的基因片段过小,在PCR检测时容易出现假阳性这一现象,专门设计了跨Bar基因和目的基因位点的引物,进行PCR扩增,获得理想的检测效果。

应用价值和现实意义

本次实验为以后实验室转基因研究奠定了基础,优化了小麦愈伤组织筛选的最佳PPT浓度,肯定了基因枪法在转基因技术中的地位,并在实验室条件下获得了具有目的基因的转基因小麦植株。一旦选育出抗性品种,将为以后培育新品种提供良好的育种材料。

学术论文摘要

论文摘要:为了进一步明确基因枪介导的转基因作物导入目的基因的准确性,本实验以西农1376幼胚为受体,以来自中草药益母草种子的抗菌蛋白基因LTP(同时导入bar基因即抗除草剂基因)为目的基因,采用基因枪法转化受体小麦品种,经优化的最适PPT浓度对其进行分化筛选,而后进行除草剂抗性筛选 和对目的基因的PCR检测,从而获得高转化率的转基因抗菌蛋白植株,为获得对小麦条锈病具有抗性的小麦新品种奠定基础。

获奖情况

获第八届西安高新“挑战杯”陕西省大学生课外学术科技作品竞赛一等奖 获西北农林科技大学第五届“挑战杯”大学生课外学术科技作品竞赛一等奖

鉴定结果

优秀作品

参考文献

使用技术: PCR分析、抗除草剂反应、基因枪法、SDS法、琼脂糖凝胶电泳检测技术等。参考文献:[1]Xingyong Yang,et al Peptides,Isolation and characterization of a novel thermostable non-specific lipid transfer protein-like antimicrobial protein from motherwort seeds[J].Peptides,2006,27(12):3122-3128. [2]BlechlA E,Olin DA.Expression of a novel high-molecular-weight gluten in subunit gene in transgenic wheat [J].Nature Biotechnology,1996,(14):875-879. [3]BliffeldM,Mundy J,Potrykus I,et al.Genetic engineering of wheat for increased resistance to powdery mildew disease [J]. TheorAppl Genet,1999,98:1079- 1086. [4]XU Zhao-Shi1,DU Li-Pu1,XU Hui-Jun1.Cojectile Bombardment[J].Acta Agronomica Sinica,2007,33(9):1548- 1552. [5]Molina A,Garcia O F.Enhanced tolerance to bacterial pathogens caused by the transgenic expression of barlry lipid transfer protein LTP[J].Plant J,1997,12:669-675. [6]GeX,etal.ResistancefunctionofricelipidtransferproteinLTP10[J].Biochera.Mol.Biol,2003,36:603-607.

同类课题研究水平概述

在粮食作物中,小麦属于遗传转化最为困难的作物之一,加上转基因研究起步较晚,基因工程育种进程明显落后于其它作物。随着基因枪的问世、新的选择标记基因和高效启动子的运用,自1991年以后小麦转基因研究开始增多。Vasil等利用基因枪介导法将bar基因导入了小麦,获得了世界上第一例小麦转基因植株。Weeks等利用基因枪介导法将GUS 基因、bar基因导入了小麦,建立了基因枪法转化小麦的技术体系。在随后的几年内,小麦转基因研究基本上借助于基因枪介导法,Zhou等利用基因枪介导法将CP4基因和GOX基因导入了小麦,获得了转基因植株。Blechl等将编码高分子量谷蛋白亚基HMW-GS基因导入了小麦幼胚和幼穗,获得了稳定表达的转基因植株。2001年以来,小麦转基因研究的重点由转化体系建立转为功能基因转移。徐惠君等利用基因枪介导法将Nib8复制酶基因导入了小麦,徐琼芳等、梁辉等分别利用基因枪介导法将 GNA基因导入了小麦,转基因小麦对黄花叶病毒病、蚜虫表现较强抗性,目前已进人环境释放阶段。随着分子生物技术的发展,国内外对小麦转基因的研究进入了一个跨越式的发展时期,本次实验对转基因小麦的检测与筛选具有很重要现实指导意义。
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