基本信息
- 项目名称：
- SDF-1α、c-MYC 蛋白调控速激肽受体-1-截短型mRNA表达的研究
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 通过构建c-myc基因shRNA表达载体；用小干扰RNA方法沉默乳腺癌细胞MCF-7的c-myc基因，分成两组，相关实验组加SDF-1α细胞因子中和抗体，用实时定量PCR检测TACR1截短型受体（TACR1-Tr）mRNA表达水平，得出最终结论MCF-7细胞在正常培养条件下，c-MYC蛋白可以反式激活TACR1-Tr的转录；但加入SDF-1α因子中和抗体后， c-MYC蛋白失去了这种激活作用。
- 详细介绍：
- 目的：观察基质细胞衍生因子1α（stromal cell derived factor 1α,SDF-1α）、c-MYC 蛋白对速激肽受体-1截短型（tachykinin receptor 1 trucated，TACR1-Tr，）转录水平的影响。方法：构建-myc基因shRNA表达载体；用小干扰RNA方法沉默乳腺癌细胞MCF-7的c-myc基因，分成c-myc+ 细胞组和c-myc- 细胞组，相关实验组加SDF-1α细胞因子中和抗体，用实时定量PCR检测TACR1截短型受体（TACR1-Tr）mRNA表达水平。结果：c-myc 基因shRNA 表达载体构建成功；在正常培养条件下，c-myc-细胞组的TACR1-Tr转录水平低于c-myc+细胞组（P<0.05）；加了SDF-1α中和抗体后，c-myc-组TACR1-Tr的mRNA表达水平高于c-myc+组（P<0.05）。结论：MCF-7细胞在正常培养条件下，c-MYC蛋白可以反式激活TACR1-Tr的转录；但加入SDF-1α因子中和抗体后， c-MYC蛋白失去了这种激活作用。
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作品专业信息
撰写目的和基本思路
- 观察基质细胞衍生因子1α（stromal cell derived factor 1α,SDF-1α）、c-MYC 蛋白对速激肽受体-1截短型（tachykinin receptor 1 trucated，TACR1-Tr）转录水平的影响。试图揭示乳腺癌转移的相关分子。
科学性、先进性及独特之处
- 根据研究结果，我们推论c-MYC蛋白对TACR1-Tr的转录有调控效应，这种调控很有可能受到细胞因子SDF-1α的影响。此结果为进一步探讨相关机理提供了实验数据，目前未见相关报道。
应用价值和现实意义
- 作品为探讨乳腺癌发生、发展的相关机制提供了新的实验数据，如能在此方面深入开展研究并得到临床证实，将为日后可能的靶向治疗药物的研发及生物治疗提供理论基础。
学术论文摘要
- 目的：观察基质细胞衍生因子1α（stromal cell derived factor 1α,SDF-1α）、c-MYC 蛋白对速激肽受体-1截短型（tachykinin receptor 1 trucated，TACR1-Tr）转录水平的影响。 方法：构建c-myc基因shRNA表达载体；用小干扰RNA方法沉默乳腺癌细胞MCF-7的c-myc基因，分成c-myc+ 细胞组和c-myc- 细胞组，相关实验组加SDF-1α细胞因子中和抗体，用实时定量PCR检测TACR1截短型受体（TACR1-Tr）mRNA表达水平。 结果：c-myc 基因shRNA 表达载体构建成功；在正常培养条件下，c-myc-细胞组的TACR1-Tr转录水平低于c-myc+细胞组（P<0.05）；加了SDF-1α中和抗体后，c-myc-组TACR1-Tr的mRNA表达水平高于c-myc+组（P<0.05）。 结论：MCF-7细胞在正常培养条件下，c-MYC蛋白可以反式激活TACR1-Tr的转录；但加入SDF-1α因子中和抗体后， c-MYC蛋白失去了这种激活作用。
获奖情况
- 无
鉴定结果
- 无
参考文献
- [1] Pennefather JN, Lecci A, Candenas ML,et al. Tachykinins and tachykinin receptors: a growing family. Life Sci 2004;74:1445–563 [13] Dang CV, c-Myc target genes involved in cell growth, apoptosis, and metabolism. Molecular and Cellular Biology. Mol Cell Biol. 1999 Jan;19(1):1-11 （共20条，因为字数要求，仅节选两条）
同类课题研究水平概述
- 前速激肽原PPT-I 是高度保守的单拷贝基因，通过替换剪切和转录后修饰产生几个属于速激肽家族的肽，如P物质和神经激肽A等，并以不同的亲和性结合三种受体 [1]。PPT-I 肽与神经内分泌系统有关联，在中枢神经系统和一些肿瘤组织呈构成性表达，也有研究发现骨髓基质细胞表达PPT-I肽，调节骨髓造血活动[2-4]，其中P物质和神经激肽A等作为中间递质参与机体多个器官功能活动[5,6]，在PPT-I 肽各类受体中，速激肽受体1在乳腺癌细胞骨转移过程中扮演极为重要的角色，TACR1分为全长型和截短型两种受体，属于G蛋白偶联7次跨膜受体。在乳腺癌细胞中，PPT-I基因过表达常导致TACR1-Tr以及几个相应的细胞因子产生，而在正常乳腺上皮细胞TACR1-Tr 表达量低，甚至难以检测，而TACR1-Fl表达量比较高，在恶性度比较高的乳腺癌细胞, 情况刚好相反，TACR1-Tr 受体表达上调是乳腺癌细胞获得侵袭性的特征之一，尤其是获得骨转移特性[7-9]。 SDF-1α又称CXCL12或前B细胞刺激因子，与趋化因子受体4形成CXCL12-CXCR4生物学轴，通过细胞内信号传导作用，调节相关转录蛋白，同样也调节TACR1受体表达[10],我们前期实验也表明SDF-1α表达水平与TACR1-Tr转录水平成负相关。 许多肿瘤的发生都与c-myc基因的过度表达和扩增有关，在一部分乳腺癌病例中c-myc都存在过表达[11-13]。c-myc基因位于8q24，c-MYC蛋白有三个亚型[14-16] ，其中最主要的是c-MYC2, 其羧基端含有螺旋-环-螺旋-亮氨酸拉链模序结构，这一模序结构与DNA结合有关，c-MYC2与转录因子MAX结合形成二聚体，然后与E盒结合，c-MYC2 氨基端发挥转录调控作用。c-MYC蛋白可以调节细胞的增值、分化、凋亡等，在细胞周期中起着很重要的作用，尤其是诱导细胞周期调节蛋白 E-CDK2，可以调控细胞进入S期 [17-19]，所以c-MYC 蛋白在不同的条件下所表现的功能千差万别。由于以前的研究没有回答c-MYC蛋白如何影响TACR1基因的转录，以及细胞因子SDF-1α是否影响c-MYC蛋白的调控效应。本研究试图用RNA干扰技术构建c-myc-和c-myc+ 细胞，观察c-MYC蛋白和细胞因子SDF-1α如何影响TACR1-Tr的转录。
