基本信息
- 项目名称：
- 破血逐瘀中药对肝癌HepG2细胞增殖及生长影响研究
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 本文选取水蛭和土鳖虫为研究对象，体外干预HepG2细胞，MTT比色法、细胞计数法检测细胞生长增殖，Tunel法及Caspase 3蛋白活性检测细胞凋亡。发现水蛭、土鳖虫提取物高浓度时有抗肿瘤作用，低浓度时反而能促进肿瘤细胞的生长增殖。提示水蛭和土鳖虫体外抗肿瘤效应无量效关系，在临床中需慎用。
- 详细介绍：
- 观察破血逐瘀中药对体外培养肿瘤细胞增殖及生长的影响。本文选取破血逐瘀中药中的水蛭和土鳖虫为研究对象，体外干预人肝癌细胞株HepG2细胞，采用MTT比色法、细胞计数法检测细胞活性及生长增殖情况，Tunel法及Caspase 3蛋白活性检测细胞凋亡情况。结果发现，水蛭、土鳖虫蛋白提取物在高浓度时（水蛭＞200μg/ml、土鳖虫﹥1000μg/ml）对体外培养HepG2细胞增殖与生长有抑制作用，能使Caspase 3蛋白活性增高；低浓度时反而能促进体外培养HepG2细胞增殖与生长，且Caspase 3蛋白活性降低。结果提示，破血逐瘀中药水蛭和土鳖虫在体外的抗肿瘤效应无量效关系，低浓度时甚至能促进肿瘤细胞的增殖与生长，提示在临床中需慎用。
作品图片
作品专业信息
撰写目的和基本思路
- 1.目的：观察破血逐瘀中药对体外培养肿瘤细胞增殖及生长的影响。 2.基本思路：活血化瘀类药物在中医药抗肿瘤中广泛应用，但也应注意部分药物也可能导致病情恶化或转移的副作用。本文以破血逐瘀中药水蛭、土鳖虫体外干预人肝癌细胞株HepG2细胞，并采用MTT法、细胞计数法等方法观察这两种药物对细胞增殖抑制及生长的影响，旨在更好的指导临床用药。
科学性、先进性及独特之处
- 1.既往的研究报道对这两种药物均称具有抗肿瘤作用，根据我们的实验发现，在体外大剂量运用时的确具有抑制作用，但随着干预剂量的减少，该抑制作用不但没有消失，反而具有促进肿瘤细胞生长增殖的作用，该发现对目前此类药物在临床抗肿瘤中的应用提出了挑战。 2.本文采用的体外培养人肝癌细胞株HepG2细胞技术，所采用检测肝癌细胞生长增殖及凋亡的方法均为标准、公认和先进的方法，保证了实验结果的科学性和先进性。
应用价值和现实意义
- 我们从增殖生长以及凋亡两方面四个观察指标观察两种破血逐瘀药物水蛭、土鳖虫对体外培养肝癌HepG2细胞的影响，结果表明：其蛋白水提物在高浓度时能抑制肿瘤细胞增殖与生长，但在低浓度时反而能促进其增殖与生长，且剂量无明显直线关系，提示在临床应用该两种破血逐瘀药用于抗肿瘤时要谨慎。
学术论文摘要
- 摘要：观察破血逐瘀中药对体外培养肿瘤细胞增殖及生长的影响。本文选取破血逐瘀中药中的水蛭和土鳖虫为研究对象，体外干预人肝癌细胞株HepG2细胞，采用MTT比色法、细胞计数法检测细胞活性及生长增殖情况，Tunel法及Caspase 3蛋白活性检测细胞凋亡情况。结果发现，水蛭、土鳖虫蛋白提取物在高浓度时（水蛭＞200μg/ml、土鳖虫﹥1000μg/ml）对体外培养HepG2细胞增殖与生长有抑制作用，能使Caspase 3蛋白活性增高；低浓度时反而能促进体外培养HepG2细胞增殖与生长，且Caspase 3蛋白活性降低。结果提示，破血逐瘀中药水蛭和土鳖虫在体外的抗肿瘤效应无量效关系，低浓度时甚至能促进肿瘤细胞的增殖与生长，提示在临床中需慎用。
获奖情况
- 1） 谭茜,徐爱良,彭延古,等.全蝎纯化液抗实验性血栓的研究[J].湖南中医药大学学报, 2010,9（30）:54-55.获“湖南中医药大学优秀论文3等奖” 2） 易小民,谭茜,彭延古,等.全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞释放血管性血友病因子和6-酮-前列腺素F1α的影响[J].中国中西医结合急救杂志,2010,17（6）:334-336. 3）该作品已被《湖南中医药大学学报》录用。
鉴定结果
- 该项目选题新颖，具有创新性；实验方法科学，路线设计合理；实验结果为进一步研究奠定了良好的基础，对临床合理用药具有一定的指导意义。
参考文献
- [1] Lin J，Yan XJ，Chen HM．Fascaplysin，a selective CDK4 inhibtor，exhibit antiangiogenic activity in vitro and in vivo.Cancer Chemother Pharmacol，2007，59：439-445． [2]韩雅莉,谢昆.土鳖虫糖蛋白的提取及抗肿瘤活性初步研究[J]. 汕头大学学报(自然科学版),2006,21(4):46-50. [3] Ahmedin J，Taylor，Elizabeth W，et a1．Cancer statistics， CA Cancer J Clin，2005，55：10-30. [4] 林吉品．中医药在恶性肿瘤治疗中的作用机理探析。光明中医，2009，24(2)：207-208． [5] 于瑞发，王杰，张博，等.复方水蛭素提取物抗移植性肿瘤的实验研究[J],实用医学杂志,2007,24(5):599-601. [6] 王丽,刘晓燕,段承刚,等.TSA对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及FHIT表达的影响[J].山东医药,2010,50(35):6-8.
同类课题研究水平概述
- 恶性肿瘤，中医认为属于“瘕瘕”、“积聚”的范畴，与血脉瘀滞、 瘀血内结有密切关系。瘀血滞络，引起不同程度的气滞、血瘀或津凝等病理变化，日久则气血痰互结，积久蕴毒，毒损脉络，瘀毒横逆旁窜，五脏损伤。现代研究也发现：当肿瘤患者微循环障碍时， 有利于促进肿瘤的发生、发展及转移， 而肿瘤细胞毒性物质的刺激等又可加重微循环障碍。癌症患者的血液中往往存在着癌细胞或微小癌栓，造成血液黏稠度增加、微循环功能障碍，促进癌细胞的增殖，肿瘤增大或转移。可见血瘀是癌症发生的主要病理改变。 因此，中医活血化瘀法则在临床恶性肿瘤的临床治疗中得到广泛应用。具有代表性的中药有效成分药物包括川芎嗪、 水蛭素、 丹参酮、莪术油等，其他还有三七醇提液、丹参注射液等。但对于活血化瘀药物的运用还是存有争议，虽然活血化瘀药物在临床肿瘤的治疗中存在积极作用，但中药有效成分复杂，即使提取物中某种有效成分具有抗肿瘤作用，但其他成分在临床治疗中会发挥何种作用？目前仍然不得而知。 已有部分报道显示，活血化瘀药物在恶性肿瘤的治疗中，尤其在肿瘤转移的问题上有争议。如韩俊庆等用活血化瘀中药合并放疗治疗鼻咽癌，发现活血化瘀中药组患者血行转移率是对照组的2.67倍；此外有报道丹参对大鼠 W256癌细胞的血行扩散与转移有明显促进作用。 由此带给我们思考，活血化瘀药物在临床该如何运用？活血化瘀药物在抗癌和促癌两者之间，到底哪些成分是抗癌作用，哪些成分是促癌作用？这些问题将是我们今后需深入探讨的问题。 对于恶性肿瘤的治疗，古人也对“血瘀”病理有深入的认识，虽然未能如西医阐明发病机制，但通过天人相应的中医整体观念对中医治疗肿瘤的各种治疗方法做出更为全面和深刻的阐释。倡导活血化瘀药物应重视临床配伍，除了根据“痰”、“热毒”等标实配合理气化痰法、清热解毒法治疗以外，尤其重视人体的正气，正所谓“正气存内，邪不可干。”强调“扶正”的重要性，补养气血，调理脾胃后天之本，护津滋阴。因此，辨证的拟方用药在很大程度上可以消除活血化瘀药物的可能潜在副作用。 因此，基于活血化瘀药物潜在的促癌作用，我们以破血逐瘀中药水蛭、土鳖虫体外干预人肝癌细胞株HepG2细胞，并采用MTT法、细胞计数法等方法观察这两种药物对细胞增殖抑制及生长的影响，旨在为中医抗肿瘤临床用药提供实验依据，更好的指导临床用药，并提醒临床抗肿瘤的运用中对破血逐瘀中药须慎用。
