基本信息
- 项目名称：
- 乳蛋白中抗氧化肽获取的新方法
- 来源：
- 第十一届“挑战杯”国赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 本研究利用木瓜蛋白酶对酪蛋白水解并对所得到的水解物进行类蛋白反应修饰，制备高活性抗氧化肽。通过对所得到的水解物进行类蛋白反应酶法修饰，利用响应面分析法对类蛋白反应条件进行优化。
- 详细介绍：
- 本研究利用木瓜蛋白酶对酪蛋白水解并对所得到的水解物进行类蛋白反应修饰，制备高活性抗氧化肽。通过对所得到的水解物进行类蛋白反应酶法修饰，利用响应面分析法对类蛋白反应条件进行优化。本研究的具体结果如下： （1）利用木瓜蛋白酶对酪蛋白进行水解，以水解度和抗氧化活性为指标，研究了不同水解反应时间(1h-5h)所得到的水解产物对抗氧化活性的影响，并进行了水解条件的优化，得到获得抗氧化活性较好的酪蛋白水解物的条件为：酶添加量为500 U/g酪蛋白、温度45℃、酪蛋白浓度5%、反应时间2 h，其水解度（DH）为10%。 （2）采用木瓜蛋白酶进行类蛋白反应，对类蛋白反应酶法修饰前后的产物进行研究。研究了类蛋白反应中底物浓度、反应温度和时间等反应条件对游离氨基含量的影响。利用响应面分析法对酪蛋白水解物的类蛋白反应修饰条件进行选择与优化，以其游离氨基含量变化为响应值，可以得出了游离氨基减少量（Y）与底物浓度（X1）、反应温度（X2）和时间（X3）等因素关系的二次回归方程，优化的修饰条件组合为类蛋白反应修饰适宜条件是为：酶添加量为500 U•g-1水解物，温度30℃，底物浓度50%，反应时间5.6 h。 （3）由于在响应面的实验设计中，中心点的条件与通过计算得到的最适宜的类蛋白反应条件几乎是一致的。 （4）本研究中，修饰产物对DPPH的清除能力表现他们在浓度为100 g/mL时的IC50 值从215 g/mL到266 g/mL.而他们对ABTS•+的清除能力则表现为当他们浓度为100 g/mL时，TEAC 值从15 μmol/g 酪蛋白 到 17 μmol/g 酪蛋白以及他们的 IC50 值从 471 g/mL到539 g/mL。
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作品专业信息
撰写目的和基本思路
- 利用酶修饰手段，改善乳中酪蛋白产物的抗氧化活性；采用水解和其逆反应（类蛋白反应）进行研究。
科学性、先进性及独特之处
- 国内外对酪蛋白水解以及其抗氧化肽的相关研究，目前多考虑各种水解条件的选择，以求制备高活性的抗氧化肽。本研究所采用的两步方法抗氧化肽制备技术与其相比，新颖性在于进一步利用类蛋白反应来提高酪蛋白水解物的抗氧化活性，这一处理手段在文献中尚未发现。
应用价值和现实意义
- 抗氧化与衰老是人们一直关注的热点，提供一种能大大提高酪蛋白产物的抗氧化活性的技术手段是很急需的，作品为进一步生产其他抗氧化产品或其他生物活性的产品提供有力的依据。
学术论文摘要
- 采用木瓜蛋白酶对酪蛋白进行水解，得到抗氧化活性较好的酪蛋白水解物，并以水解物为底物在木瓜蛋白酶作用下进行类蛋白反应制备高活性酪蛋白抗氧化肽。酪蛋白水解时酶添加量为500 U/g酪蛋白、温度45℃、底物浓度5%、反应时间2 h。利用响应面分析法得到类蛋白反应的最优条件为：酶添加量为500 U/g水解物、温度30℃，底物浓度50%、作用时间5.5 h。毛细管电泳结果确认，类蛋白反应后抗氧化肽的组成情况发生变化。抗氧化活性分析方法进行评价结果表明，所制备出的抗氧化肽对两种自由基的清除能力显著提高，表明抗氧化活性与类蛋白反应有关。
获奖情况
- 吴丹，赵新淮，李铁晶.酪蛋白水解物的酶法修饰优化与抗氧化活性改善.农业机械学报（EI）．发表于2009年11期 吴丹，赵新淮.高抗氧化活性的酪蛋白水解物的新法制备.食品科学.已接受 发明专利《高活性酪蛋白抗氧化肽的两步法制备技术》，申请号：200910071495.6
鉴定结果
参考文献
- 1.酶水解技术 2.酶修饰（类蛋白反应技术） 3.毛细管电泳技术 4.光谱技术 5.自由基清除 6.游离氨基酸测定 7.冻干技术
同类课题研究水平概述
- 本研究采用两步法制备高活性抗氧化肽。利用类蛋白反应并筛选出适宜的反应条件，对酪蛋白水解后得到的产物——抗氧化肽进行进一步修饰，提高酪蛋白水解物的抗氧化活性，并且利用毛细管电泳技术对类蛋白反应产物进行表征。 与已发表的类似论文或相关内容论文的区别：国内外对酪蛋白水解的相关研究，以及对酪蛋白抗氧化肽的研究，目前多考虑蛋白酶、温度、时间、pH、浓度等各种水解条件的选择，以求制备高活性的抗氧化肽。本研究所采用的两步方法抗氧化肽制备技术与其相比，新颖性在于进一步利用类蛋白反应来提高酪蛋白水解物的抗氧化活性，这一处理手段在文献中尚未发现。同时，利用毛细管电泳对类蛋白反应产物的分析，也未见国内外的研究报道。
