基本信息
- 项目名称：
- 致病性弧菌选择性鉴别培养基的研制
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 科技发明制作B类
- 简介：
- 研制出检测5种弧菌（拟态弧菌、溶藻弧菌、海鱼弧菌、鲨鱼弧菌和霍利斯弧菌）的选择性鉴别培养基。利用该培养基，能够特异、灵敏、准确地将目标菌株与其他10多种致病性弧菌区分开。不仅能大大缩短用常规的微生物方法进行弧菌检测的时间，简化检测程序，而且节约检测成本。最重要的是，这个作品能直接通过肉眼观察检测结果，非常适用于基层的食品安全快速检测。
- 详细介绍：
- 研制出检测5种弧菌（拟态弧菌、溶藻弧菌、海鱼弧菌、鲨鱼弧菌和霍利斯弧菌）的选择性鉴别培养基。利用该培养基，能够特异、灵敏、准确地将目标菌株与其他10多种致病性弧菌区分开。不仅能大大缩短用常规的微生物方法进行弧菌检测的时间，简化检测程序，而且节约检测成本。最重要的是，这个作品能直接通过肉眼观察检测结果，非常适用于基层的食品安全快速检测。
作品专业信息
设计、发明的目的和基本思路、创新点、技术关键和主要技术指标
- 中央“十二五”规划提出要制定和实施海洋发展战略，提高海洋开发、控制、综合管理能力。作为3个全国海洋经济发展试点之一的浙江省，正积极争取从海洋资源大省向海洋经济强省转变。影响水产品安全性的一大重要原因就是由细菌污染引起的水产品质量安全问题，其中海产品中致病性弧菌是引发人体疾病的主要病原菌，由致病性弧菌污染引起的疾病占细菌性食物中毒的27%以上，所以加强水产品中致病性弧菌的检测是非常有必要的。本作品是“十一五”国家863计划海洋领域重点项目中的分项目，针对水产品中致病性微生物的快速筛检。致病性弧菌对水产品安全的威胁引起各个国家研究机构的重视，各国高度关注其在水产品中的污染情况调查及其快速检测和分离技术的研究，改进工作得到了高度关注，已成为相关研究的热点。 创新点： 自主设计研发的5种致病性弧菌选择性鉴别培养基有一个很重要的优点，即借助该作品能直接通过肉眼观察得到检测结果，经济、简便、易行、敏感、特异；选择性鉴别培养基是一类非常好的致病菌鉴别检验技术。国内外已有的致病性弧菌的显色鉴别培养基只有针对霍乱弧菌和副溶血型弧菌的，尚无本项目所研究的5种致病性弧菌选择性鉴别培养基。 技术指标： 分别依据不同种弧菌所含酶系统不同，生长代谢途径、能利用的底物和代谢产物的组成也不同，对某些特定抑菌物质的耐受力也不同，从而达到目的菌和非目的菌的选择；依据菌种不同，通过加入一定的指示剂来显示这种不同，以达到菌种鉴别的效果。
科学性、先进性
- 致病性弧菌有十多种，除副溶血性弧菌、霍乱弧菌和创伤弧菌外，目前许多国家已经开始关注其他致病性弧菌在食物中的存在问题，国际上对水产品安全的检测标准在不断增加。选择性鉴别培养基是在生化反应的基础上开发的新技术，它将传统的细菌分离与生化反应有机的结合起来，使得检测结果直观，易于观察辨别，且具有低成本、特异性强、灵敏度高和检测快速、操作方便等优点。选择性鉴别培养基是国内外微生物检测发展的一个主要发展方向。 利用显色培养基鉴定微生物是近年来开发的新型微生物快速检测技术，通过在选择性培养基中加入细菌特异性酶的显色底物，直接根据菌落颜色对菌种做出鉴定，减少了进行纯培养和生化鉴定的步骤，大大提高了检测效率，降低了检测成本。也就是说，选择性培养基既能有效提高样品的抽检率、保证检测效果，又具有快速、经济、简便的优点。
获奖情况及鉴定结果
- 详见项目图片1
作品所处阶段
- 实验室阶段
技术转让方式
- 将培养基均申请专利，通过售卖专利进行技术转让；也可与各检验机构或水产品加工企业合作，转让一部分技术。
作品可展示的形式
- 实物和图片
使用说明,技术特点和优势,适应范围,推广前景的技术性说明,市场分析,经济效益预测
- 选择性鉴别培养基是一种新型微生物检测诊断试剂，它利用微生物产生特异性酶与相应显色底物反应而显现出某种特定颜色的原理，对微生物进行筛选分离, 直接根据菌落颜色就可以对菌种做出鉴定，减少了进行纯培养和生化鉴定的步骤，大大提高了检测效率。该方法具有特异性强和灵敏度高的特点，在微生物筛选鉴别方面快速准确，较传统培养基而言，可有效减轻因假阳性或假阴性造成微生物检测实验室繁重的工作量。 可用于各种致病性弧菌的地方性流行病学调查、水域及水产品致病性弧菌污染状况调查、水产品生产加工企业原料把关、生产过程及时监控和产品质量安全检验、水产品流通和贸易部门的质量把关检验、各级检验检疫机构日常检验、地方政府相关部门对水产品致病性弧菌的监管、预警及致病性弧菌疫情发生时的及时确诊等。综上所述，该项目的研究结果具有很好的应用前景。 将研究出来的检测系统经过一定时间广泛应用于相关的企业和部门，其直接和间接的经济效益会很大，且是可以长期获得的。
同类课题研究水平概述
- 目前已有的致病性弧菌的检测方法有： 1. 传统培养基法：该方法具有以下一些明显的缺点：检测周期长，一般说来鉴定一种细菌需要7～10 d；程序复杂，细菌学培养方法需经富集培养、选择性分离、形态特征观察、生理生化反应、血清学鉴定等过程。 2. 免疫学检测方法： (1) 免疫磁珠法 (MACS) (2) 酶联免疫吸附法：该方法具有灵敏、特异、快速、操作简便以及易于自动化操作等特点。但是，由于免疫反应特异性强,对试剂的选择性高，致使很难同时分析多种成分对结构类似的化合物有一定程度的交叉反应；分析分子量很小的化合物和很不稳定的化合物有一定的困难。而且，操作过程中易出现孔间交叉污染，出现假阳性。 3. 分子生物学方法： (1) PCR方法 (2) 核酸探针技术 (3) 环介导扩增技术：该方法具有特异、高效、快速、简便、检测容易等优点,但缺点是其引物设计比传统的PCR复杂，并且因为其产物的独特性，为单链DNA的分离增加了难度。 (4)基因芯片技术：该技术具有快速、高通量、高灵敏性、重复性好等优点。每个乳胶颗粒上都可以满满地(以共价键牢固结合的方式)包被核酸。因为探针密度高，产生的信号强，加上使用荧光检测，所以敏感性大大高于任何现有分析方法。但多指标检测时引物的不兼容、非特异性结合、不同PCR 产物与不同探针之间交叉杂交等情况，决定了很难在单管中进行过多的PCR反应。 4. 生物传感器检测方法： 电子舌方法：虽然电子舌它具有信息量丰富、易智能化、使用寿命长、成本低廉、快速简便等独有特点，但是稳定性不够。 以上几种快速检测方法相对检测周期缩短，但这些方法所需的试剂耗材和仪器都较昂贵，检测成本非常高，而且需要非常专业的人员操作，难以广泛应用于检测部门，特别是基层检测机构和企业。 5. 选择性鉴别培养基：目前致病性弧菌所用的选择性鉴别培养基主要是TCBS、科玛嘉的弧菌显色培养基和海博的弧菌显色培养基。但这些培养基共同存在二个问题：特异性较低，分离的菌株杂菌较多或呈假阴性；如TCBS培养基只能将弧菌属分为两大类，创伤弧菌在TCBS琼脂平板上生长时很像副溶血弧菌，只能通过一些生化反应把两者区分开来，目前，有些成熟的微生物快速鉴定系统已经被应用于拟态弧菌的检测并得到认可的主要有法国梅里埃的API 20E 和全自动微生物分析仪(VITEK)等。
