基本信息
- 项目名称：
- 洛伐他汀合成途径关键基因过表达载体的构建
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 通过构建洛伐他汀合成途径关键基因的克隆并构建过表达载体，以期通过转化红曲获得高产洛伐他汀的红曲菌株。
- 详细介绍：
- 心脑血管疾病是全球致死率最高的疾病，预防和治疗心脑血管疾病主要依靠降血脂药品。以红曲为原料的降脂药品占据了中药降脂药品的大部分市场份额，其市场需求量逐年攀升。红曲中的主要降脂药用成分为洛伐他汀，国家药品标准对红曲为原料的降脂药品也是以洛伐他汀为指标性成分进行药品准入检验的。利用分子生物学手段构建洛伐他汀合成途径关键基因mokH、mokF和MplaeA的过表达载体。
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作品专业信息
撰写目的和基本思路
- 目的：进一步了解mokH、mokF和MplaeA在红曲中的功能。并通过构建洛伐他汀的关键基因的过表达载体这一研究为下一步工作中转化红曲获得洛伐他汀高产菌株打下基础。 基本思路：采用双酶切的方法将目的基因与表达载体连接在一起并转入大肠杆菌DH5α中验证并保存。
科学性、先进性及独特之处
- 试图为利用基因工程的手段获得高产洛伐他汀的菌株打下前期基础。此方面的研究目前较少。
应用价值和现实意义
- 构建成功的过表达载体可以转化红曲菌株，通过筛选获得洛伐他汀高产菌株，从而降低功能红曲相关药品或保健品的成本。
学术论文摘要
- 红曲的药用价值和保健功效日益引人关注，其中洛伐他汀作为红曲主要的降脂因子成为科研热点和红曲产业发展的重点。相关规定已将洛伐他汀定为功能红曲的标志性功能成分。mokH、mokF和MpleaA是红曲霉次级代谢产物洛伐他汀生物合成的关键酶基因，分别编码转录因子、脂酰转移酶和正向全局调控因子，其可能直接或间接控制洛伐他汀的生物合成。本课题的研究内容主要是对上述三个基因以及所编码的蛋白进行核苷酸序列的同源性分析、氨基酸序列分析、亚细胞定位分析、疏水性分析以及结构域分析并利用基因工程手段将从紫红曲霉中克隆得到的上述三个基因与pCAMBIA1300M载体分别通过限制酶酶切位点连接，构建过表达载体。
获奖情况
- 获得昆明理工大学首届大学生创新性实验计划优秀项目二等奖。
鉴定结果
- 该项目具有较好的可实施性，并已成功构建洛伐他汀合成途径关键基因mokH、mokF和MplaeA的过表达载体。
参考文献
- 《洛伐他汀最新研究进展》 <Identification of the mokH Gene Encoding Transcription Factor>
同类课题研究水平概述
- 目前对红曲洛伐他汀生物合成基因的研究已经很成熟，其基因种类和功能也被一一发现和证实，传统的方法多采用改善发酵条件或通过大量筛选高产菌株来实现洛伐他汀的高产，而通过基因工程的手段改造菌种使洛伐他汀超表达的方法却鲜有报道。
