基本信息
- 项目名称：
- 赣南脐橙衰退病快速检测技术研发及发生率调查研究
- 来源：
- 第十二届“挑战杯”省赛作品
- 小类：
- 生命科学
- 大类：
- 自然科学类学术论文
- 简介：
- 本项目研制和优化针对赣南脐橙衰退病具有专一性、实用性的快速检测技术体系，运用研制的快速检测技术调查赣南脐橙衰退病的发生情况。并能在病害发生早期有效的检测出病害的存在和发生发展情况，为生产上危险性病害的早期预防提供了有效的检测手段，具有重要的生产实际意义
- 详细介绍：
- 赣南已经成为世界上最大的脐橙主产区，在生产中存在危险性病害的威胁，特别是衰退病，严重的制约着产业的进一步发展，甚至带来毁灭性的危害。本项目研制和优化针对赣南脐橙衰退病具有专一性、实用性的直接组织点免疫法（DTBIA）和反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的快速检测技术体系，运用研制的快速检测技术调查赣南脐橙衰退病的发生情况及感染率调查。进一步运用限制性片段长度多态性（RFLP）技术对赣南脐橙上感染的柑橘衰退病毒（CTV）株系进行了组群分析。为病害的深入研究、早期检测和防控技术的制定奠定基础。
作品图片
作品专业信息
撰写目的和基本思路
- 目前江西赣南是世界上最大的脐橙集中产区，生产中存在着衰退病的严重威胁，造成巨大的经济损失，制约着产业的进一步发展。本研究以赣南脐橙高效安全生产为目标，研制和优化针对赣南脐橙衰退病具有专一性、实用性的快速检测技术体系，运用研制的快速检测技术调查赣南脐橙衰退病的发生情况，为病害的深入研究和防控技术的制定奠定基础。
科学性、先进性及独特之处
- 科学性：本研究优化血清学快速检测方法，使其经济、简单易行，适合赣南脐橙产区衰退病的快速检测，设计脐橙衰退病的特异性、专一性引物；优化PCR扩增参数，获得最佳的扩增条件和最好的检测灵敏度，各方面的研究均具有相关的科学依据。 先进性：建立的针对赣南脐橙产区衰退病的快速检测技术达到国内先进水平；系统调查赣南脐橙产业上衰退病的发生情况和危害程度等研究成果属国内领先水平。
应用价值和现实意义
- 赣南脐橙是赣南农民脱贫致富的重要支柱产业。实际生产中存在危险性病害的威胁，特别是衰退病，严重的制约着产业的进一步发展。本项目以赣南脐橙高效安全生产为目标，重点解决赣南脐橙衰退病的血清学和PCR快速检测技术，通过研制的快速检测技术对田间病害发生危害情况进行调查研究，掌握赣南脐橙衰退病发生的情况及危害程度，制定科学有据的防控措施，提升脐橙衰退病的防控水平，确保脐橙产业安全健康发展具有重要的战略意义。
学术论文摘要
- 江西赣南是我国脐橙最适宜生长区域之一，目前已成为世界上最大的脐橙集中产区。本研究建立了赣南脐橙衰退病毒的直接组织点免疫法（DTBIA）和反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的快速检测技术。通过对赣南脐橙14个主产区柑橘果园进行调查和样品采集，运用建立的DTBIA和RT-PCR技术对脐橙衰退病毒检测，结果表明赣南脐橙主产区衰退病危害严重，并且检测出试验中收集到的1498份柑橘样品中有673份样品携带衰退病毒，感染率达44.9%，表明所检测的各个产区均有衰退病发生。进一步运用限制性片段长度多态性（RFLP）技术对赣南脐橙上感染的CTV株系进行了组群分析，结果发现感染赣南脐橙的CTV株系主要为1、3组群的CTV强毒株系。为确保赣南脐橙产业安全健康发展，在生产上应加大衰退病的检测和防控力度。
获奖情况
- 无
鉴定结果
- 无
参考文献
- [1] Zhou C Y. Studies on the mechanism of mild strain cross protection against Citrus tristeza virus[D]. Sydney: The University of Sydney, 2001:1-5. [2] Gillings M R, Broadbent P, Indsto J, Lee R F. Characterization of isolates and strains of Citrus tristeza closterovirus using restriction analysis of the coat protein gene amplified by the polymerase chain reaction[J]. Journal of Virological Methods, 1993,44:305-317. [3] Garnesy S M, Permar T A, Camber M, Henderson C T. Direct tissue blot immunoassay (DTBIA) for diction of Citrus tristeza virus (CTV) [A]. In: In: Moreno P, da Graca J V, Timmer L W. Proceeding 12th conference of the international organization of citrus virus[C]. Riverside:IOCV, 1993,39-50. [4] 周常勇, Hailstones D L, Connor R, Barkley P, Bowyer J. 一种微量、快速抽提柑橘衰退病毒(CTV)核酸应用于RT-PCR扩增的方法[J].福建农业大学学报, 2001,30(增):200.
同类课题研究水平概述
- 柑橘衰退病（Citrus tristeza virus，CTV）又称速衰病，是世界性的柑橘病毒病害，广泛分布于世界各柑橘产地，对全世界的柑橘产业造成了严重威胁。危害轻者可引起树势衰退，产量下降，品质变劣;重者可引起柑橘树死亡，对柑橘高产优质生产构成严重障碍。国内外学者应用生物学、血清学和分子生物学方法对CTV进行了研究。 目前国内外学者应用生物学对CTV进行研究的技术是酶联免疫吸附测定（ELISA）。它是一种固相吸附和免疫酶技术相结合的方法，将抗原和抗体包被在固相支持物上，使免疫反应在固体表面进行，并借助结合在抗原或抗体上酶与底物的反应所产生的颜色来进行检测，在此基础上，发展了组织印迹法(DTBIA)。这些技术直接将组织印迹在膜上，不仅保持了ELISA的灵敏性和特异性等特点，而且简化了操作程序，使病毒检测更加快速、简单、方便，且印迹在硝酸纤维素膜上的样品保持时间较长，检测结果能直观地显示病毒感染的部位，适用于植物病毒的大规模普查。应用分子生物学方法对CTV进行研究的技术主要是PCR扩增技术，是CTV检测中最有效和最灵敏的方法之一，并得到了广泛的应用。它是一种体外模拟自然DNA复制过程的核酸扩增技术，即通过引物核酸的某个区域而进行的重复双向DNA体外合成。能把很少量的遗传物质迅速而简便的扩增百万倍，使原来无法进行分析和检测的各种项目得以完成。 随着种植规模地不断壮大，赣南已经发展成为世界上最大的脐橙主产区，由于在生产中存在危险性病害的威胁等因素的影响，导致产量和品质得不到很好的提升，使我国脐橙产量仅居世界第三。危险性病害中特别是脐橙衰退病，严重的制约着产业的进一步发展。因病原菌存在多株系分化现象，不同的地方病原物存在不同的生物学特性，以往研究结果也表明建立的快速检测技术，如血清学检测技术针对当地的病原菌株系能起到很好的检测效果，而在其他地方检测效果不明显，甚至没有作用。而目前针对赣南脐橙产区适用性和专一性的衰退病快速检测技术和赣南脐橙衰退病的发生情况还未见报道，相关研究也很薄弱，更无生产上可应用的快速检测方法，制约着生产上病害的早期检测、预测预报等关键技术的开展，针对此问题，本研究立足赣南脐橙高效安全生产重点解决赣南脐橙生产存在的衰退病的快速检测技术，提升赣南脐橙病害的防控水平，对确保脐橙产业安全健康发展具有重要的战略意义。
